【求助】怎样使用Miliphore的超滤管？

最新回复

• dmg (2014-3-25 21:40:19)

  
  1.不用处理
  2.不能灭菌。样品过滤除菌。
  3.可以重复使用。0.1M的NaOH处理，水洗后，20％的乙醇保存

• hyuu (2014-3-25 21:40:39)

  
  1 如果不在乎蛋白吸附就可以直接加样离心，如果在乎可以考虑用BSA封闭再离心
  封闭办法 说明书有
  2 应该是不能高压灭菌的 应该给你开始就是无菌状态 可以考虑用暴露在紫外灯夏试试
  3 可以重复使用 最好一个管子专门做一个东西 保持很简单 下面的那个管子加满灭菌水+0.02%叠氮钠 然后上面超滤管也加满灭菌水+0.02%叠氮钠
  下次用的时候清洗干净即可
  楼上20%乙醇不能长期保存 我尝试过 Millpore公司的人说20%乙醇只能隔夜 长期会破坏膜 长期只能用灭菌水

• vtongli (2014-3-25 21:41:05)

  曾经使用20％乙醇保存1个多月 未见异常，重复使用十多次后，离心过程开始漏液。一般采用4000rpm 5－8分钟 即可将4ml样品浓缩至1ml以下至几十微升。
  蛋白量可能会因吸附减少，以前做了一个蛋白 17000Da 减少约30％左右 但多半是由于离心到最后 浓度过高 附着所至 如果用缓冲液洗涤，可以回收。
  最近做了一个蛋白 30000多，对浓缩液和超滤后的滤过液进行了检测，滤过液基本无目的蛋白。

• hyuu (2014-3-25 21:41:27)

  
  我的是20%乙醇保存2个月就漏液，连续两次，然后问Miliphore的支持 建议用灭菌水

• PPT (2014-3-25 21:41:50)

  
  谢谢各位！
  我买的一根是滤液量为4ml的，滤膜是V字型的，用移液枪吸取未能过滤的液体时，是不是不能碰滤膜啊？
  还有处理好样品后，滤膜怎么清洗，是将离心管里的滤膜取出后放在水里涮涮就行，还是有其它的洗法为好？
  我用15ml的离心机离心，样品中的杂质不是很多，因为我尝试将样品80℃加热45min后离心（样品中的拮抗物质耐高温），未见沉淀，我应该选择多大的转速离心，离心多长时间为好，离心机的为平转子！谢谢！

• dmg (2014-3-25 21:43:46)

  
  枪头或者移液针头尽量不要碰膜 以免造成机械损伤，我们一般用200ul的黄枪头吸取 操作过程小心一点即可。
  清洗可以用纯化水离心一下 然后荡洗几遍，这个产品本来就是设计一次性的 不过 经平时实际操作经验，只要注意操作，应该能离心几次 我也有运气不好的时候，离心两次就over了。 我没有询问过millipore的工程师了解过膜保养的问题，按照楼上说的 可以考虑用无菌水浸泡。注意别长菌即可。
  离心速度 3000－4000rpm 几分钟即可 我以前用的也是15ml那种无冷却功能的离心机 做细胞的常用的离心机。不过这个没有硬性规定 根据你需要达到的终体积即浓缩倍数决定。

• hyuu (2014-3-25 21:45:51)

  
  LZ 这个是不是看转数 是看离心力的 不能超过4000g离心力！！！
  说明书建议3000g 我用了几次都是3500g

• nn255 (2014-3-25 21:46:39)

  
  大家看来都用过了，呵呵，millipore最近出了一本超滤管使用手册，里面使用方法和应用写的不错，据说是限量的，看看能否要到。我没有电子版的，否则放在网上大家共享。

• PPT (2014-3-25 22:41:18)

  
  好的，谢谢大家了！我参考大家的建议，先摸索一下，然后再把使用心得跟大家讨论一下！
  说明书我今天从网上下载了一篇，是英文版的，看起来有点费力，也就没看！

• nikun230 (2014-3-25 22:42:01)

  
  很简单啊
  拿20%乙醇泡着,可以反复用的,那东西很贵的,要用转角离心机,不能用掉蓝式离心机,转速在他推荐的最大转速的70%就可以了,不用太大的,蛋白浓缩除盐很不错的哈,俺刚用过

• misswu61 (2014-3-25 22:44:55)

  
  你们用来脱盐具体是怎么做的，技术支持让我将过柱后的蛋白液加进去，然后再补充灭菌去离子水至10ml，5000g，4度离心20min，并重复3次，也就是要补充3次3次去离子水，他说这样脱盐效果很好，可以达到99%，你们是这么做的吗？还是一次搞定呢？另外用镍离子柱过蛋白大家一般收集多少ml呢？我一般才收2ml，蛋白浓度倒挺高的，是100ml的菌液的蛋白。