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【求助】包涵体蛋白如何做ELISA？
【求助】包涵体蛋白如何做ELISA？
最近在做ELISA和WESTEN，但我的蛋白是包涵体，纯化出来后也相当难溶解。制抗体时是用5％的SDS溶解的。现在做ELISA，用纯化的蛋白做抗原包被，但蛋白无法溶解在一般的溶液里，能否也用SDS去溶解，然后去包被呢？对结果有什么影响呢？
非常感谢高手的指点！！
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【求助】包涵体蛋白如何做ELISA？
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字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-3-26 23:27 作者: yysr238 来源: 分析测试百科网
最新回复
tie8 (2014-3-26 23:31:02)
ELISA中用于包被的抗原一般都是要求是可溶性的蛋白，所以用包含体包被不太可行。不过参考一些人工肽段的包被情况，你可以尝试先用DMSO是否能够溶解包含体，如果能溶解的话再用PBS稀释到工作浓度后包被试试。另外利用SDS好像不太可行，因为即使目的蛋白溶解了，SDS的强去污性似乎也不容易使该蛋白和96孔的底板聚丙乙烯结合
ha111 (2014-3-26 23:31:19)
或许可以用8M尿素溶解一下然后去包板，也许会有些变性蛋白能结合上去
bluelake (2014-3-26 23:38:45)
你就用8M尿素去溶解包涵体，然后找个磁力搅拌器，开启后滴入你需要蛋白量，然后进行包被即可，这相当于在稀释复性，由于你不需要保证蛋白的活性，只需要可溶性蛋白即可，可以试一试，因为即使你的蛋白复性率很低，也有少部分蛋白可以复性成功，我们就是这样做的
yysr238 (2014-3-26 23:40:43)
再次感谢各位的热心帮助！！
ROSE李 (2014-3-26 23:41:02)
似乎还没有听说过6M盐酸胍溶解不了的包涵体，也许你配的6M盐酸胍没有到标准的浓度吧，比如说配1L的盐酸胍，是加一点水，然后加入6M的盐酸胍的量然后再用水补足到1L的体积。
另外如果是脂蛋白，你还可以尝试着加些去垢剂
66+77 (2014-3-26 23:43:57)
6M 盐酸胍也不好，上面也有氨基，也能跟板子结合，竞争掉蛋白的结合。我们公司做包涵体免疫的时候用8m urea或者6m盐酸胍，但是用于检测的我们用2%skl的buffer溶解，一般来说包被是没有什么问题的
mod=8048 (2014-3-26 23:46:10)
SKL本质上讲不是变性剂，不过高浓度的时候有些包涵体也是能被溶解的，不过变性能力没有尿素和盐酸胍强
盐酸胍会竞争蛋白的氨基？
这个我到没有遇到过，怎么说蛋白上面的氨基比盐酸胍本身的氨基多的多，要竞争也不是蛋白的对手丫
不过楼主以上说的方法都可以试试，生物实验就是这样，意想不到的情况太多了
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