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【求助】保存快一年的bl21经过iptg诱导后还能表达蛋白吗

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-3-27 13:00    作者: purrr    来源: 分析测试百科网

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【求助】保存快一年的bl21经过iptg诱导后还能表达蛋白吗
各位大侠请问：
我师兄构建好的bl21，它的质粒是pet28－c（＋），一年前我师兄能够成功表达一个重组蛋白，现在我重复他的这一步实验，发现用iptg（浓度是1mM）诱导后，跑sds－page，发现诱导前和诱导后条带差不多，目的蛋白只是一个本底表达，刚才在园子里看到“作为表达菌，最好每次表达前均用刚转化的表达菌，否则表达量很低”，请问我有没有必要重新把构建好的质粒再转入空的bl21中？
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  • tangxin_80 (2014-3-27 13:00:47)

    如果你手里有构建好的质粒，当然 重新转化到表达菌 是最好的。
    这样保证表达量。
    另外，你诱导原来的菌种，跑page，表达量低，还有一个可能，就是诱导条件不对。
    所以，如果继续摸条件诱导的话， 势必要花费很大功夫，还不一定成功。
    目前，你最应该做的就是重新转化。

  • 8princess8 (2014-3-27 13:01:07)


    能告知一下为什么质粒没有丢失但就是无法表达蛋白吗？
    真是百思不得其解

  • purrr (2014-3-27 13:01:28)


    我也觉得奇怪，应该补充的一点是 我的IPTG和我师兄买的不是一个厂家，我的是上海生工促销时的，他的是购自加拿大BBI公司，你们说 试剂有影响吗？

  • orangecake (2014-3-27 13:01:46)


    BL21里有recA,有这东西在就不应该保存这么长时间还用.可以放在DH5a里保存的,因为这个是没有recA的.
    (recA是重组中关键的基因)

  • purrr (2014-3-27 13:02:05)


    明白！1，那么是否可以用BLR (DE3)来代替？BLR (DE3)是 recA- derivative of BL21 recA- expression host; recommended for use with tandem repeats，这个资料是刚查到的，
    2 再请教一个问题，怎么知道bl21含有什么基因？bl21有类似质粒的gene 图谱吗

  • bring (2014-3-27 13:02:24)


    2. Genotype of BL21(DE3)
    F-
    ompT
    hsdS
    gal
    dcm
    lamda DE3
    1. 对于保存来说可能没什么问题，但是对于表达有可能会有点小麻烦。因为recA还算是个相对重要的基因，没有这家伙的话对菌的生长不利。也就是说表达的时间可能会增长不少。

  • purrr (2014-3-27 13:02:47)


    终于弄明白原因了，原来菌种保存这儿出了问题
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