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【求助】帮忙看看我这张图

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-3-27 20:04    作者: minran_1980    来源: 分析测试百科网

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【求助】帮忙看看我这张图

这是一张p-IRS-1的western blot图，只有背景无条带，不知下一步应该怎样做。已经试过1：500-1：2000的浓度，都没有条带，这次蛋白还是新提的，不过组织放-80度冰箱已经一年了，而且中间有一次冰箱坏掉，温度上升到了4度一天，后来又将组织重新转移到-80度冰箱，不知这会不会有什么严重影响，我其他的一些磷酸化蛋白都杂得出来，不知为什么这个这么难弄，总是弄不出来，而且抗体是新买的，实验室其他人也没有人做出来。是santa的抗体，不知是不是抗体不好。
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最新回复

  • minran_1980 (2014-3-27 20:05:05)

    附带说明，两边的条带是MARKER

  • hold住 (2014-3-27 20:06:03)


    蛋白抽提好吗？

  • minran_1980 (2014-3-27 20:06:37)

    我觉得没问题,因为同一次跑的western其他的蛋白包括磷酸化的都杂的出来

  • 89tongzijun (2014-3-27 20:07:55)


    你用的单抗还是多抗？我也用过santa的多抗，出来的结果跟你得差不多，背景很深，条带恨不清楚，不知道是不是他们抗体的问题，你可以换一家抗体试试

  • 131415 (2014-3-27 20:08:22)

    一抗是不是羊抗？羊抗不要用奶粉或bsa封闭。

  • minran_1980 (2014-3-27 20:09:52)

    一抗是兔抗的。

  • glass (2014-3-27 20:10:47)


    我的一抗是羊抗人的.为什么"羊抗不要用奶粉或bsa封闭"?那用什么封闭呢?请教!

  • zhy平平 (2014-3-27 20:11:17)

  • xyw5 (2014-3-27 20:12:11)

    Western blot Rreport
    Primary Antibody：  Rabbit IRS-1 antibody,Cell Signaling,2382 (1:1000)
    Purpose-bindProtein’sMW：  About 180kD
    Gel Concentration：  12%
    Secondary Antibody：  Goat anti Rabbit IgG/HRP (SCBT, Catalog# sc-2030,1:10,000)
    注：阳性条带以Gelpro4 版凝胶光密度分析软件进行分析，测其IOD
    图片1


    24898261.jpg

  • xyw5 (2014-3-27 20:31:07)


    这个是我做的IRS-1的结果，你的p-IRS-1应该很好做的，我的条件你可以参考一下！
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