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【求助】电泳条带分不开

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-3-27 23:01    作者: huifeng0516    来源: 分析测试百科网

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【求助】电泳条带分不开

我在做western跑电泳时，一个月前跑的很好，marker能看到清晰的7条带，现在跑什么条件都没变，可就是marker分不开，一起跑下来了，样品的溴酚蓝也不在最前沿，涌道有一条蓝色跑散了，缓冲液重配了两次，制胶的东西都是一个月前配的，并且Tris用之前测过pH值也没变，胶能凝，是在不知道什么原因，快崩溃了。。。：（
到底是什么原因啊？有人能帮帮我吗？万分感谢！！！
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  • tuuu2 (2014-3-27 23:02:09)


    一个月前跑的很好。而制胶的东西都是一个月前配的，或许能说明点问题，会不会是试剂问题

  • huifeng0516 (2014-3-27 23:02:30)

    QUOTE:

    原帖由 tuuu2 于 2014-3-27 23:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

    一个月前跑的很好。而制胶的东西都是一个月前配的，或许能说明点问题，会不会是试剂问题
    但是胶能凝不能说明胶没问题吗？

  • tuuu2 (2014-3-27 23:02:59)


    胶能凝,说明APS TEMED没有问题,可能你的缓冲液有问题

  • is2011 (2014-3-27 23:03:17)

    配好的试剂放在4度冰箱一般是没问题的，我现在用的东西除了10%的AP是现用现配(我一般分装好放—20度冰箱)，其他的都是很久之前（大概快一年了）配的，不会影响胶的配制。因此我认为最大的可能是电泳缓冲液的问题。因为电泳缓冲液使用的Tris－甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高的电压剃度，压着蛋白质分子聚集到一起，浓缩为一狭窄的区带。当样品进入分离胶后，由于胶中pH的增加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子之后，同时由于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。
    因此，你可以看看是不是甘氨酸有问题。

  • huifeng0516 (2014-3-27 23:03:35)


    谢谢楼上的热心回复，我的电泳缓冲液是新配的，测了pH8左右，甘氨酸干粉不会出问题吧？我昨天又把储备胶和ＳＤＳ重新配了,今天再试一下,再不行我也快崩溃了

  • huifeng0516 (2014-3-27 23:03:52)

    另外,Ｔｒｉｓ的pH可以用试纸测吗?pH计的校正液没了,所以测的不大放心

  • one (2014-3-27 23:04:05)


    我师妹有一次好像丙稀酰胺加少了就回出现你说的情况

  • youyou99 (2014-3-27 23:04:26)


    你确定分离胶和浓缩胶的ph值都没有问题和弄反？分不开应该是胶或者缓冲液ph值的原因

  • DNA (2014-3-27 23:04:44)


    分离胶的ph值有问题,分不开不是电泳缓冲液ph值的原因
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