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【求助】请教 双向电泳 蛋白定量

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-3-28 10:10    作者: yayya    来源: 分析测试百科网

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【求助】请教 双向电泳 蛋白定量

我是双向电泳新手，想请教各位大侠：
1、实验室有一台蛋白核酸测定仪（型号GeneQuant Pro RNA/DNA Calculator），打算用该仪器按 Bradford 方法测蛋白含量，不知该方法效果好不好？
2、在准备试剂时发现，按 Bradford 方法测蛋白含量需 Bradford 液，但不知如何配制该液，网上查询也没查到具体的配方，望各位不吝赐教。
3、配制裂解液时，看到有两个版本（尿素，CHAPS，IPG缓冲液），另一个版本还要加 DTT。我时按前者配的裂解液，不知两者效果上有什么差别；而且DTT不是要使用前加的吗？
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最新回复

  • 3N4G (2014-3-28 10:10:34)


    1.一般都用Bradford 方法测蛋白含量
    2.就是G-250(包含G-250,58%磷酸,水),一般的生物化学与分子生物学实验手册都有.
    3.一般都包含DTT(用前加),或DeStreak(太贵)

  • wmp1234 (2014-3-28 10:10:56)


    Bradford 方法 很多地方都有的 啊

  • am10 (2014-3-28 10:11:18)

    考马斯亮蓝溶液：考马斯亮蓝G-250（10%，M/V），95%乙醇（5%，V/V），磷酸（10%，V/V），过滤后，4℃棕色瓶保存。
    Bradford法：
    标准曲线制作：分别取0 μl，5 μl，10 μl，15 μl，20 μl，40 μl浓度为0.5 mg/ml的标准BSA溶液于eppendorf管中，加0.15 mM NaCl溶液补至100 μl以配制成如下浓度梯度的BSA溶液：0 mg/ml，0.025 mg/ml，0.05 mg/ml，0.075 mg/ml，0.1 mg/ml，0.2 mg/ml，最后加900 μl考马斯亮蓝溶液，旋转混匀5分钟后分光光度计上595 nm处读数。
    样品定量时，用0.15 mM NaCl溶液将样品（蛋白质溶液）配制成100 μl的稀释液，加900 μl考马斯亮蓝溶液，旋转混匀5分钟后分光光度计上读数。

  • am10 (2014-3-28 10:11:38)

    丙酮沉淀一下背景好 定量也准
    还可以浓缩

  • yayya (2014-3-28 10:11:58)

    谢！！
    我这里有 TCA（进口） 和 丙酮（国产，纯度大于99％），
    沉淀时联合使用是不是比单纯用丙酮沉淀效果好？

  • xyw5 (2014-3-28 10:12:26)


    我实验比较发现还是TCA-丙酮沉淀的蛋白跑电泳效果好！
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