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【求助】做WESTERN时封闭后到底要不要洗了再加一抗？

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-3-29 15:20    作者: memory    来源: 分析测试百科网

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【求助】做WESTERN时封闭后到底要不要洗了再加一抗？

在论坛里看了很多帖子，有的人说封闭过后用TBST洗3次再孵一抗好，有的人说不用，直接孵一抗；有的人说用TBST洗，有的人说用PBS洗即可；不知道哪一种才是正确的，请有经验人士说一下好吗？？
另外，封闭液配好后要过滤吗？如果过滤的话是用滤纸就可以还是要用滤器啊？？？
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最新回复

  • vcve (2014-3-29 15:20:32)

    封闭液配好后不用过滤, 封闭过后用TBST洗3次再孵一抗.

  • orangecake (2014-3-29 15:20:55)


    这些其实都问题不大，疏于个人习惯问题。封闭后蛋白已经吸附到膜上，轻微的洗一下没关系。当然了多数人还是提倡不洗，前提的是你选择的脱脂奶粉要好，不要有太多的沉淀物。

  • memory (2014-3-29 15:21:15)

    这么说的话，我配好封闭液后还是要过滤吗？为了去除沉淀物？

  • yonger (2014-3-29 15:21:39)


    就像楼上的几位说的，在封闭后并不需要洗，而且通常我们稀释一抗的溶液也往往使用封闭液。封闭液我们使用的是国产的脱脂奶粉，纯度比较高，不需要过滤！

  • hold住 (2014-3-29 15:21:56)


    请问楼上，冲洗液选用PBS/PBST(做免疫组化的袋装试剂)做Western的作用与TBS/TBST的效果有差别吗？哪个效果好。

  • yychen (2014-3-29 15:22:12)


    我们实验室同时使用这两种缓冲液，效果差别不大。

  • c86v (2014-3-29 15:22:29)

    从封闭液中拿出来后只需在蒸馏水中冲洗几下即可用于与一抗孵育

  • ritou1985 (2014-3-29 15:22:46)


    封闭后不用PBST洗，直接用封闭液孵一抗，封闭液我们用5％－7％国产的脱脂奶粉配即可

  • xyw5 (2014-3-29 15:23:05)


    封闭时是用封闭液进行的，
    封闭后又是要一抗孵育，而一抗一般是用封闭液稀释的，
    所以后就没有必要再进行洗涤了！
    封闭液用1×TBS加5％（w/v）脱脂奶粉配制，没有可见沉淀物的话，你过滤他干啥？
    本人用的是完达山牌脱脂奶粉（不是做广告啊，当然如果厂家的硬要给论坛和本人回报的话，偶是不愿意拒绝的）^_^
    注意了，一次少配些，如20ml1×TBS/T,加入1g脱脂奶粉即可满足一次封闭的需要。

  • 3648755 (2014-3-29 15:23:23)


    我用的是伊利的高钙脱脂奶粉,速溶技术过关,封闭效果也可以,呵呵
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