【求助】PreScission Protease

最新回复

• hold住 (2014-3-31 17:02:26)

  
  请简单说明求助内容……
  其实我可以告诉你很多实验室都有自己可以克隆表达的prescssion，你可以让你老板找那些实验室要……

• zhy平平 (2014-3-31 17:02:48)

  
  谁有克隆表达的prescssion Protease？这种酶的提取方法需要试剂盒吗？能提出高效率的酶吗？会引入其他蛋白酶吗？我真诚的向大家讨教！

• idea2011 (2014-3-31 17:08:28)

  
  谁有克隆表达的prescssion Protease？
  上ncbi找找看，有的话，向人家呀。
  这种酶的提取方法需要试剂盒吗？
  晕，这个问题。提取蛋白啊，要纯化的，一般不需要试剂盒。
  能提出高效率的酶吗？
  看你水平了，纯化，条件，ph等。
  会引入其他蛋白酶吗？
  看你纯化水平了，纯度高的话，不会有其他酶的
  我真诚的向大家讨教！

• redbutterfly (2014-3-31 17:10:14)

  谁有克隆表达的prescssion Protease？这种酶的提取方法需要试剂盒吗？能提出高效率的酶吗？会引入其他蛋白酶吗？我真诚的向大家讨教！
  
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  这个酶是专门针对pGEX-6T的，所以，这么酶常规也是GST融合，表达后用GST柱纯化即可，应该是很方便，另外，你酶切以后采用GST纯化，穿透峰就是你的酶切蛋白，理论上是这样

• wmp1234 (2014-3-31 17:10:49)

  我也很需要这个酶，当时考虑价格贵，就用了pGEX-4t-1,thrombin 切割，但这样步骤繁琐一点。
  如果能要到prescssion Protease就太好了。

• zhihui小新 (2014-3-31 17:11:08)

  
  我可以用SDS－PAGE分离，切胶，把GST－prescssion Protease切下，透析我要的蛋白，并使其恢复酶的活性？

• wmp1234 (2014-3-31 17:11:36)

  QUOTE:

  原帖由 zhihui小新 于 2014-3-31 17:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  我可以用SDS－PAGE分离，切胶，把GST－prescssion Protease切下，透析我要的蛋白，并使其恢复酶的活性？

  这种可能性不大，你表达的不是可溶性蛋白么？如果是，你可以GST纯化后，酶切，再过柱即可得到目的蛋白

• zhihui小新 (2014-3-31 17:12:11)

  
  关键是老板没有钱给我买柱子，呵呵，我要用最低的成本，做出可以接受的结果。很辛苦！呵呵！

• yonger (2014-3-31 17:18:30)

  QUOTE:

  原帖由 zhihui小新 于 2014-3-31 17:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  关键是老板没有钱给我买柱子，呵呵，我要用最低的成本，做出可以接受的结果。很辛苦！呵呵！

  晕，没钱没柱子，那你表达gst的融合蛋白干什么啊。从胶上弄下蛋白，已经是变性的蛋白了，还怎么有酶活性啊。

• zhihui小新 (2014-3-31 17:18:48)

  
  师姐做的，用PET没有表达出来，她毕业了，我接着她的做，现在我打算换载体。呵呵！