【求助】2D电泳点太少怎么办？

最新回复

• hustwb (2014-4-05 19:03:16)

  
  一般来说，细菌的蛋白种类还是比较多 的，你的结果可能以下原因所致，一是你的细菌中确实蛋白种类很少，而是你用的是考染，如果是这样，可用银染。

• dreaming (2014-4-05 19:04:52)

  对！考染的点老是很少，难道我以后分析都得用银染做？我想是不是我的样品制备方法有问题呢？

• hyuu (2014-4-05 19:05:08)

  最重要的是蛋白的浓度和纯度，
  如果我没有猜错，应该是你的蛋白定量有问题，
  定量准确的情况下，800ug做ph4-7的24cm的胶条效果都非常好的
  你应该想办法浓缩蛋白最好用透析冻干法，
  丙酮沉淀法没有那么可靠，可以用原来不含蛋白的蛋白溶解液做
  对照，就会发现不含蛋白的溶解液也会产生沉淀的（这还可能影聚焦效果的）

• dreaming (2014-4-05 19:05:33)

  
  非常感谢两位的帮助！
  我的蛋白定量是用考马斯亮蓝法测的，确实不太准确，不知道用什么方法测更好一些？我们实验室准备买试剂盒的，但是还要有一段时间。
  另外还想问一下，透析冻干法具体怎么做啊？

• hyuu (2014-4-05 19:05:53)

  
  透析冻干法，搜一下有这样的帖子

• damingxia0904 (2014-4-05 19:06:23)

  
  用bradford法测定蛋白浓度没有问题的，一般都用银染，但考染的点对做质谱成功率更高。我用银染切的点做质谱还不错。

• 987789 (2014-4-05 19:08:35)

  银染做质谱的话要快速银染吧，成功率有多少呢？

• damingxia0904 (2014-4-05 19:08:51)

  
  需要做质谱时，只要不用戊二醛就行。图上的点亮度只要比较高，成功率在80％以上，当然得找好的公司去做。

• dreaming (2014-4-05 19:09:33)

  
  请问用damingxia法测定蛋白浓度需要用水化液溶解标准蛋白并且作为对照来做标准曲线吗？CHAPS等的影响怎么去除啊？

• dreaming (2014-4-05 19:09:51)

  
  最近过滤考马斯老是出问题，第一遍滤还有点发红呢，再滤又变蓝了，都配了两次了，不知道是什么问题？？