【求助】Bradford法测定蛋白质含量

最新回复

• kewanqi2011 (2014-4-09 16:26:20)

  严谨地应该自己做标准曲线，而且每次测量都要同时做条标准曲线。套用公式或以前的标准曲线可能会影响结果的准确性和可靠性。

• fsdd817 (2014-4-09 16:26:49)

  
  如楼上，每次都应该做标准曲线。
  其实说明书上也有指出：
  注意事项
  1. 亮蓝G250染色液使用前请颠倒混匀。
  2. 蛋白标准请在全部溶解后混匀。
  3. 将亮蓝G250染色液恢复到室温再使用，有利于提高检测的灵敏度。
  4. 需可检测560-610nm之间波长的酶标仪或分光光度计，最佳检测波长为595nm。
  5. 待测样品中蛋白浓度过低（<0.5 µg/ µl），需要增加样品体积至5 µl~10 µl。
  6. 亮蓝G250染色液可以用蒸馏水稀释1倍使用，但是线性范围相应变窄（0.5 µg/ µl ~ 5 µg/ µl）。
  7. 要得到更为精确的蛋白浓度结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔，每次均应做标准曲线。
  参考见 cuturl('http://show.bioon.com/reagent/Show_product.asp?id=64006')
  而且我本人测蛋白浓度，每次做的标准曲线都有差异。

• 8princess8 (2014-4-09 16:27:21)

  如果是定性，当然可以不做标准曲线，如果定量，必须做标准曲线。至于为什么，自己随便找个蛋白，做10次测量，看看得到的结果就知道了。

• INK (2014-4-09 16:27:45)

  
  南京建成的蛋白定量试剂盒 的说明书上就是没有说明怎么做标准曲线 不知道其他公司的说明书上的标准曲线的方法 会不会适合啊？？我也是遇到这个困难了 和楼主一样？

• remonte (2014-4-09 16:28:05)

  对啊，我就是南京建成的，说明书上没有说要怎么做标准曲线。不知道除了南京建成的，其他哪个公司的试剂盒要好些？

• jujuba (2014-4-09 16:28:27)

  
  用不着试剂盒。

• 3N4G (2014-4-09 16:28:53)

  你的标准品一直就是按程序里面做的标准曲线吗？

• xue258 (2014-4-09 16:29:14)

  要想发较好的论文，还是做标准曲线的好。
  特别对于新手，做条理想的标准曲线也是一个实验技能的培养。不要还没学会做事，首先学会了偷懒。

• remonte (2014-4-09 16:29:47)

  但是我买了南京建成的试剂盒里根本就没有说明要做标准曲线，只是给了现成的公式。我也想自己做标准曲线，请问哪个厂家的试剂盒需要做标准曲线呢？

• yonger (2014-4-09 16:30:12)

  
  Bradford法显色深浅会随反应时间长短而变化。
  这里是我们实验室做标准曲线的方法，供参考：
  1：配1mg/ml BSA 作蛋白标准
  2：取两毫升Bradford法工作液分别加入0、50、100、150、200ul 1mg/ml BSA，至终体积2.2ml，不足的体积用水补足
  3：混匀后放置5min 595nm测吸收，根据吸收值和对应的浓度做曲线。算出标准曲线的相似度。（我们的要求是99.7以上才可以用）
  4：另外做一管加125ul 1mg/ml BSA的，在标准曲线上读出浓度，检验标准曲线的准确性。