【求助】siRNA的终浓度

最新回复

• hold住 (2014-4-09 17:08:36)

  
  siRNA转到细胞内的终浓度不太好确定，只能将加入的初始浓度控制好。进入细胞内的量与你的细胞种属、转化试剂的效率都有关系。
  可参考invitrogen等网站的protocol，选择几个不同浓度，看看哪个浓度的干扰效果好。我用的是100nmol，化学合成的siRNA。
  供参考，祝试验顺利。

• fsdd817 (2014-4-09 17:09:28)

  
  请问
  100pmol是做多少细胞呢？一个6well？
  我试过终浓度150nM，HeLa在1个半小时后全死亡。
  30nM细胞没有死，但是也没有knockdown。

• hold住 (2014-4-09 17:09:50)

  我用的是100nmol/35cm^2,相当于6孔板的一个孔。
  其实，对于siRNA的终浓度实在是因细胞种类和细胞状态而异的。还要多多摸索。

• eric930 (2014-4-09 17:10:15)

  建议以50nM的终浓度为基点,开始上下调整优化,找到最适浓度.siRNA的有效作用浓度在10~100nM.过低可能起不到沉默的效果;而过高会产生很大的毒性,使细胞死亡!