【求助】为什么我的胶怎么也凝固不了！

最新回复

• ROSE李 (2014-4-10 15:14:03)

  
  检查一下APS浓度什么的，我有一次也是弄错了APS浓度就是不凝！APS好像是10%吧

• bamboo16 (2014-4-10 15:14:21)

  
  放到37度，试试。

• orangecake (2014-4-10 15:14:56)

  刚做过一回。也曾遇到过你的类似情况。换掉APS和TEMED，另外，重新配制Acr-Bis后一切ok

• wawa (2014-4-10 15:15:17)

  
  AP的量是最重要的了,我刚开始做的时候也好长时间不凝,把AP的量加倍就好了(20%),但是AP一定要现用现配.分离胶聚半个小时就可以了,很容易聚的,浓缩胶时间要长一些,因为浓缩胶有一个"老化"的过程,大概至少要45分钟吧,加样孔也要用电极缓冲液清洗用滤纸吸干,因为浓缩胶的Acr-Bis的浓度相对分离胶要低,所以浓缩胶相对比较脆和粘

• tangxin_80 (2014-4-10 15:15:54)

  
  实验室之前 曾经遇到过这种情况，分析了所有东西之后，觉得还是aps和temed的问题， 重新买了之后，一切ok!
  你的情况估计是这两个某个失效了，买新的吧，应该可以解决。
  APS 一周重新配一次就可以，现用现配太麻烦，好像不是太必要。
  如果这些溶液没问题， 室温下就可以很容易凝固，实际上肉眼看10分钟左右就凝了，但是还是要多等一下，让胶 凝固的更彻底。30分钟够了。
  祝好运！

• PINK (2014-4-10 15:16:18)

  
  我觉得你最有可能原因有两个:
  一是你的30%Acr-Bis母液配错了,很有可能是双丙没有加.
  二是你的TEMED过期了,APS浓度稀点或时间长点都不会有出现不凝的情况.
  你还可以做个试验,把你的胶放到50烘箱里去,看凝不凝,如果凝的很硬而且脆就是没有加双丙,如果软而有点韧性,那是正常的.

• u76mp (2014-4-10 15:16:40)

  谢谢大家的提议。TEMED一般能放多久啊？我们实验室是师姐留下来的，一直在4度。我曾经把胶放在高压锅盖上它都没有凝固，依然象水一样，AP的浓度也没有错，而且加倍加量也试过，依然不行，其他的成分我都仔细的重新配置了2遍，只有TEMED没有变？听说这个人家可以用几年的。而且我就在头一天凝固的很好，下午冰箱停电2小时以后就什么都不行了，我想2小时应该不会影响多大吧，我做WB快有1年了，从来没有遇到这样的问题，真是很郁闷，问题还是没有找到。

• redbutterfly (2014-4-10 15:17:03)

  TEMED放4度没问题的,我同实验室的也有胶凝不了的情况,后来发现是APS的问题.一般要放4度,而且一周配一次.重要的是浓度要对.另外,我们实验室也出现过整瓶APS潮解,再配新的当然也用不成.____________借别人的试下._____现在这样的天气,也就二十分钟肯定凝了.

• 3648755 (2014-4-10 15:17:23)

  
  与其在这猜测，还不如把TEMED换掉，时间是最为宝贵的

• 2541 (2014-4-10 15:18:07)

  我曾经也遇到过相似的问题。结果发现是AP潮解了，重新配制就OK了。个人感受TEMED可以使用很长时间的，首先不应该考虑是TEMED的问题。

• 33号 (2014-4-10 15:18:28)

  
  可能的情况有：
  1.TEMED基本应该是不需要怀疑的；
  2.APS溶液需要现用现配，且前提条件是你的原包装没有整体潮解，这个东西总愿意潮解，很不听话的：)
  3.必要时可以加大APS的使用浓度以加快胶的凝结速度，不过这种做法只在冬天时需要；
  4.另外我想提醒一下楼主，SDS-PAGE是高温时凝的快，低温时凝的慢，或者是不凝，我们做胶时为防止配制好的buffer凝结，都是在冰上配制混合液的，所以如果你的胶不凝，那你放到4度就更不会凝了，呵呵
  这个问题应该是很容易解决的，不用上火，我们实验室去年也发生了例似情况，很快就解决了，放心吧！

• any333 (2014-4-10 15:18:46)

  
  换瓶新的APS

• windy+++ (2014-4-10 15:19:07)

  
  TEMED 失效会发黄

• ii077345 (2014-4-10 15:19:30)

  
  建议1：直接挑点APS固体加入胶液中，立即搅匀
  2、待胶各配方加完混匀，上层加异丁醇封胶后，静置，不要去动它，待一定时间后，用肉眼观察胶有否分层？
  3、TEMED一般是不会变质的。
  4、向周围实验室要点APS及TEMED，排除一下你的这两个试剂的问题。
  GOOD LUCK!

• 2541 (2014-4-10 15:19:53)

  
  如果所有试剂都重新配过，依然无济于事的话，那么可以肯定的是你的过硫酸铵固体变质了，需要重新买新的，买回后小份分装密封，最好低温保存，每2周重新取一份，重新配制，一定可以解决这个问题！

• plaa (2014-4-10 15:21:54)

  
  就是APS跟TEMED的问题的!!!

• mercedes (2014-4-10 15:22:19)

  
  你好~
  如果原因实在找不到，直接买公司的一些现成的试剂盒，广州达晖生物卖的凝胶试剂盒质量好且便宜，比自己配制还要省钱省时间。37636952-14

• yes4 (2014-4-10 15:22:36)

  
  APS出问题的情况比较多。好用的APS加水能听到轻微的爆鸣音，如果静静的，可能就是不能用了。
  凝胶凝结温度不要低于20°，否则影响凝结

• one (2014-4-10 15:22:55)

  
  我以前也遇到同样的问题,一直不知道怎么回事,aps我也现配的,TEMED我又问同事借用的,可是还是不行,到最后我又重配了30%的丙烯酰胺,结果就出来了,交联是不是有问题啊,