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【求助】双酶切割胶回收

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-4-12 17:07    作者: 04906    来源: 分析测试百科网

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【求助】双酶切割胶回收

请大家帮我分析一下：
　　　
我双酶切重组质粒，经电泳检测已经切出来了，然后割胶回收，跑大孔胶后（加了70ul样)，经紫外透射仪检测，目的条带很淡，几乎看不到,试剂盒回收什么也没有,做了几次都这样,请大家帮忙指点一下,谢谢!
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最新回复

  • am10 (2014-4-12 17:07:50)

    有图吧！

  • am10 (2014-4-12 17:08:10)

    用了好点的切胶回收试剂盒

  • 04906 (2014-4-12 17:08:35)

    不是试剂盒的问题,是我跑大孔胶的时候就看不出条带,无法切割

  • 987789 (2014-4-12 17:09:09)

    条带的分子量应该是多大呢？是不是溴酚蓝俺盖了条带

  • 小荷尖尖 (2014-4-12 17:09:35)


    两个原因：
    1、质粒浓度太低了。
    2、酶切的效果不好，建议在不断搅动的37度恒温水中，切5个小时。
    第一个问题，因为你要的肯定是质粒中的外源，所以可以让质粒浓度大一些
    二，体系用50ul就够了，用NEB的酶不错，各加两ul。

  • 04906 (2014-4-12 17:09:58)

    谢谢各位的热心帮助,我的是517个bp,昨天本来有条带了,可是没回收到

  • yhz1973 (2014-4-12 17:10:25)

    可以试一试QIAquick nucleotide removal kit. 不用跑胶，直接从酶促反应物中直接回收

  • caihong (2014-4-12 17:10:51)


    大孔胶（加70ul样)相对需要更多的样品量才能观察到，你用50ul酶切反应体系酶切时间长些，然后用小些的胶孔电泳就可以了，我一般每孔加40－45ul,每次都没问题，你可以试试！
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