【求助】蛋白用不用IPTG诱导表达量差不多？

最新回复

• plaa (2014-4-12 17:21:42)

  
  有一种说法我记得叫渗漏，就实在不加IPTG诱导时，由于培养基或者菌种本身可以产生类似乳糖的结构，诱导了表达
  不过还是应该做好对照仔细判定一下是否是这种情况，表达量没变化但是蛋白是否有变化还是应该Western确证一下的
  祝好运！

• gogo (2014-4-12 17:23:05)

  楼上说的对,你可以尝试加点葡萄糖.
  可能你的培养基有问题,我也遇到过这种情况!

• applebook=213 (2014-4-12 17:23:23)

  问版主最后问题解决了吗？我也遇到了同样的问题，不加IPTG诱导是表达量也很大，与诱导后的表达量差不多。

• lixi559 (2014-4-12 17:24:43)

  请问版主最后问题解决了吗？我也遇到了同样的问题，不加IPTG诱导是表达量也很大，与诱导后的表达量差不多。
  
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  这种表达就是所谓的本底表达，对于pet系列的表达系统，即使在没有IPTG 存在的情况下，也会有少量lacUV5 启动子表达的T7 RNA聚合酶，因此存在目的蛋白的本底表达。
  如果想抑制本底表达，对于pET系统你可以根据目的蛋白的特点，通过选用T7/T7lac 启动子，pLysS或pLysE宿主菌，以及培养基外加葡萄糖等方法严紧控制蛋白表达水平。
  对于加入IPTG前后表达量差不多的问题，可能是加入的IPTG的时机不对，如果加入IPTG时还有足量的葡萄糖，这时会抑制乳糖操纵子，限制目标蛋白的表达；还有可能是加入的IPTG的量不够，没有充分诱导，对于带普通T7 启动子的pET 重组子，终浓度为0.4mM 的IPTG 可以实现完全诱导，而带有T7lac启动子的载体则需要终浓度为1mM 的IPTG 才能完全诱导。

• yueban-1147 (2014-4-12 17:30:35)

  我的培养基是LB，加葡萄糖加多少呢？怎么加阿？

• lixi559 (2014-4-12 17:31:13)

  我的培养基是LB，加葡萄糖加多少呢？怎么加阿？
  
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  可以加入0.5%的葡萄糖，在灭菌前加入，一起高温高压灭菌。