【求助】电泳条带明显歪斜

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• PPT (2014-4-12 23:13:51)

  QUOTE:

  原帖由 米囡 于 2014-4-12 23:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  我之前跑SDS－PAGE电泳时溴芬蓝压得挺齐，最近上样改变：第一孔，10ulmarker 第2－8 20ul 的样品，第九个孔，10ulmarker，第十个孔，10ulmarker。200v常温跑，在浓缩胶内溴芬蓝条带呈一水平线，但进入分离胶后随着时间推移，溴芬蓝明显歪斜， ...

  看看跑电泳的时候底部的气泡是不是赶净了

• purrr (2014-4-12 23:14:32)

  
  是气泡的原因吗？怎么赶气泡呀？我也经常遇到这个问题。

• seven7 (2014-4-12 23:16:12)

  
  不知道你的图形是什么样？上样缓冲液有没有问题，建议第一孔和第9孔和第10孔用上样缓冲液补齐到2010ul。

• langlang (2014-4-12 23:16:41)

  QUOTE:

  原帖由 purrr 于 2014-4-12 23:14 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  是气泡的原因吗？怎么赶气泡呀？我也经常遇到这个问题。

  
  赶气泡的时候可以稍微倾斜电泳槽，气泡就会慢慢跑到buffer里面了。小的气泡其实对电泳影响不大，就怕那些空泡状的气泡，在底部会影响到蛋白质的泳动而形成典型的中间高两边低的“皱眉”状

• 冰儿0109 (2014-4-12 23:17:08)

  
  我觉得楼主的意思是，整个胶的溴酚兰倾斜，不是每一个孔里面的倾斜，不知楼主是这个意思吗？不太理解，最好能附上图片，便于大家分析，讨论。
  可以考虑一下：
  1。是否是胶的问题，是不是没有完全干的时候就用了？
  2。盐离子浓度太高，可以稀释样品离心. 除去沉淀物，或采用透析（1o nnnol rifs．HC1，pH 7．4透析过夜），凝胶过滤等方法脱盐。

• 喵咪 (2014-4-12 23:18:09)

  
  就我的跑胶经验“
  可能有如下几种原因：1。上样不均匀，包括样品的量、浓度（所有样品应该尽可能做到盐离子浓度一致）、PH值等都可以影响跑胶的效果，上样量不能太多。
  2。配胶本身的问题：包括胶的PH值，SDS含量，胶的聚合程度，胶配制时候的均匀度，
  3。跑胶时候底部是否有气泡，跑胶缓冲液是否配制正确
  我不知道究竟你的胶是什么样子的，你可不可以传个图片上来，大家一起研究

• gogo (2014-4-12 23:18:42)

  
  重新配制一下缓冲液试试

• yes4 (2014-4-12 23:19:30)

  
  电泳缓冲液的因素占的比较大，我们实验室的缓冲液每次用到底部时，跑出来的SDS胶都很丑，条带不平而且弥散严重。建议重配缓冲液，尽量依照标准配方。
  另外要把每孔的上样量调成一致，不足的孔用PBS+2×SDS上样缓冲液补足。
  赶气泡的话，除了倾斜电泳仪使气泡浮出外，还可用金属针头弯成直角的注册器在胶底部来回赶，也可清除气泡。

• 气泡 (2014-4-12 23:19:52)

  
  还真是个赶气泡的好办法

• #问号# (2014-4-12 23:20:23)

  
  有无可能是常温是高电压跑（200V）？？？