【求助】怎样验证是不是我要的目的蛋白？

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-4-12 23:21 作者: pou 来源: 分析测试百科网

我在做表达时遇到了一奇怪的现象，就是重组基因在未诱导和诱导时均在目的基因大小的地方出现一条带，且该带在空载中没有。已经试过了不同的条件，但结果均一样，请问我怎样才能证实那条带是不是我要的目的蛋白？？

redbutterfly (2014-4-12 23:22:17)

wester blot或者纯化一下试试
二子 (2014-4-12 23:22:47)

WB验证啊
dream2013 (2014-4-12 23:23:10)

正常,有的蛋白表达的时候,存在泄露表达
pou (2014-4-12 23:23:36)

谢谢,如果是泄露表达,那我接下来做大量表达时,用不用再诱导?有没有其他要注意的事项??
zhezhe (2014-4-12 23:24:59)

那就要看无诱导状况下的表达量能否满足你的需要，以及诱导与否影响表达的程度。
另外，为验证是否是你的目的蛋白，直接做个点杂交可能更快速省时。
下面一步就是纯化啦!
GOOD LUCK!
finger (2014-4-12 23:25:31)

麻烦问以下，要是点杂交的话，我是不是应该用纯化的蛋白？另外，我的目的蛋白是整体的一个组分，能不能用整体的免疫血清来杂交？？谢了"

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1、点杂交不需纯的蛋白。
2、你的目的蛋白是整体的一个组分，一般用整体的免疫血清来杂交应该可以得到阳性结果的，你试一下吧。