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【求助】总是连成一条线啊？
【求助】总是连成一条线啊？
跑胶总是连，就是染胶或者转膜曝光后条带都连成一条线了，我也有看过论坛上别的帖子，我每次都检测电泳缓冲液还有tris的PH值，胶是5％、10％的，电压是80、120，每次都放在冰盒里跑样品，为什么还是练成一条线啊？
向大家请教！谢谢！！
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字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-4-12 23:26 作者: flyxx05 来源: 分析测试百科网
最新回复
flyxx05 (2014-4-12 23:27:11)
请问有人知道是什么原因么？我上样浓度有20、30、40的
白白的 (2014-4-12 23:27:29)
越是小分子量蛋白这种现象越严重，可能跟蛋白的扩散有关
所以你不妨加大电压，快点儿跑
上样的时间也有影响，有次上60个孔，用了一个多近俩小时，跑完后Marker明显是上窄下宽的，小marker扩散了
flyxx05 (2014-4-12 23:27:52)
QUOTE:
好的，谢谢，上样应该时间不会很长，我加大电压试试。yysr238 (2014-4-12 23:28:14)
样品质量问题
一般细胞蛋白容易出现这样得情况,可能和里面一些不溶得膜脂类,核酸类有关,
当然,上样量大,上样体积过多,胶不均匀等都有关系.
至于电压,问题不大,全程50V跑,也不会出现这样得情况
flyxx05 (2014-4-12 23:28:33)
我跑的是组织，用碧云天的RIPA(强)裂解液，今天跑胶加大电压，跑出来低下溴酚蓝特别厚，就是不是在最低层，因为没有照相机，所以用手机照了一下，应该可以看出来下面溴酚蓝不是一条线，左右都是上样缓冲液，第二道是MARKER，然后有三道样品（因为还没有染色，所以看不出来），请问问大家是什么原因溴酚蓝没有压成一条线呢，在堆积胶也是这样的宽度。电泳缓冲液的PH值都是现用现测的。
请大家看看帮帮忙，谢谢啦！
65134560.snap.jpg
米西11米西 (2014-4-12 23:29:48)
浓缩胶buffer pH 6.8, 上下槽缓冲液Tris-甘氨酸pH 8.3, 分离胶bufferpH 8.8。
如果用大电压跑，温度会比小电压大，会抵消速度快对弥散的影响，所以电压不是主要原因。建议首先把各buffer的PH调准，如果用大电压跑，可以放在4度冰柜里。另外得确定胶已经完全凝好。
flyxx05 (2014-4-12 23:30:14)
QUOTE:
所有的PH值都是每次都重新测的啊，还会有什么原因吗？二丫头466 (2014-4-12 23:30:35)
一个小经验，如果一次点很多样品的话，可以在点完一面后，通电稍微跑1-2分钟，先让样品进入浓缩胶后，可减少扩散。
还有拔梳子的时候动作轻一点，尽量不要有前后的动作，很容易造成胶跟板分离，导致扩散。
u234 (2014-4-12 23:30:56)
【求助】总是连成一条线啊？