【求助】二抗洗脱后不能及时显色，怎么办？

最新回复

• ffaa (2014-4-12 23:32:12)

  
  1.放在TBS里面就可以,我也犯过这样的错误.
  2.但是我是用的化学发光法检测的,不知道会不会有差别.

• #甜# (2014-4-12 23:32:38)

  
  最好去别的实验室借一下
  按理说二抗的酶会很快失活的，我们都要求在几个小时（<=4h）的时间内完成显影，不过既然有的人说二抗都能重复用，想必残留的活性也够显得，可是对于DAB显色，实在不知道能不能过夜……
  建议你第二天重新杂二抗，再显色……

• 脱水萝卜 (2014-4-12 23:33:02)

  谢谢！我明天按你说的再用二抗杂交一遍。

• feima+ (2014-4-12 23:33:31)

  如果二抗洗完后不能立即进行曝光，最好将膜放在TBST液体并置4度冰箱保存，一般可以放几个小时，因为酶在常温下放的时间太久会影响酶的活性，影响曝光结果。若果时间太久，最好重新加二抗，二抗的浓度可以较正常时稍降低。

• 脱水萝卜 (2014-4-12 23:33:56)

  
  实验结果出来了。我汇报一下：
  我放在TBST中，4度过夜，第二天一早重新加二抗，然后洗脱。
  能正常显色。
  不过有很多非特异性条带，是什么原因呢？是一抗浓度太大吗？

• 雪花子 (2014-4-12 23:34:14)

  
  你试试重新用5%的牛奶封闭,再重新加一抗孵育,后洗涤在加二抗孵育,洗涤后再发光看看

• 脱水萝卜 (2014-4-12 23:34:40)

  QUOTE:

  原帖由 雪花子 于 2014-4-12 23:34 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  你试试重新用5%的牛奶封闭,再重新加一抗孵育,后洗涤在加二抗孵育,洗涤后再发光看看

  因为结果不好，我已经把膜扔了。我重做