【求助】WB常见问题请教

最新回复

• 101010 (2014-4-13 01:08:40)

  
  1.可以染一些泳道做对照，看是跑胶的问题还是转膜的问题，可能是你转膜时气泡没有赶干净。
  2.二抗浓度再怎么调整也不会改变趋势吧，建议你按照说明书上的浓度做一个梯度试试。
  你还是贴上图来，说清楚具体条件，这样好给你建议。

• 00无名指00 (2014-4-13 01:09:01)

  
  1，可能中断与转膜时，膜与胶之间有气泡有关。弧形，估计就是常说的笑脸状，可以参考这个帖子 cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2503155_0.html')，
  还有这个 cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=9742526&sty=3&keywords=%D0%A6%C1%B3+western')
  2，二抗，我一般是按照说明书要求，不要太高，室温半小时足够。没有听说过二抗浓度可以改变各组趋势，尽量把二抗稀释液均匀覆盖正张膜，室温晃摇。

• yyaxw84 (2014-4-13 01:09:22)

  
  我先用高浓度的二抗，出现本应该高的条带却很浅；但不该亮的条带却相比深一点。最终降低二抗浓度时，结果又截然相反。－－－据说二抗浓度高，加上显色剂时，荧光消退可能快？

• 00无名指00 (2014-4-13 01:09:54)

  QUOTE:

  原帖由 yyaxw84 于 2014-4-13 01:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  我先用高浓度的二抗，出现本应该高的条带却很浅；但不该亮的条带却相比深一点。最终降低二抗浓度时，结果又截然相反。－－－据说二抗浓度高，加上显色剂时，荧光消退可能快？ ...

  什么叫“不该亮的条带”？你是指非特异性条带？
  二抗浓度高，自然会增加非特异性条带出现，所以二抗的浓度和时间都不要超过说明书要求范围。
  还有就是二抗浓度高的时候，上面标记的酶自然也高，可以迅速消耗掉ecl中的底物，记得前阵子在坛子里看到类似的帖子

• 00无名指00 (2014-4-13 01:10:50)

  
  cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5936631&sty=1&tpg=1&age=-1')
  一个好帖子，推荐

• ha111 (2014-4-13 01:11:12)

  你做得是什么?内参?
  转膜时如有大气泡是会出现中断现象,
  但是如果荧光强发生淬灭,淬灭速度也会不一样得,
  有一次带我师妹暴GAPDH时,进暗室,看到各条带荧光强度都差不多,她压了两张,第一张不错,第二张时间长了,有两个条带就只有一半,断了,
  cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/9743519')

• yyaxw84 (2014-4-13 01:12:19)

  你是指非特异性条带？
  二抗浓度高，自然会增加非特异性条带出现，所以二抗的浓度和时间都不要超过说明书要求范围。
  还有就是二抗浓度高的时候，上面标记的酶自然也高，可以迅速消耗掉ecl中的底物，记得前阵子在坛子里看到类似的帖子
  
  ==============================================================================================================
  
  什么叫“不该亮的条带”？我是指生理盐水对照组组织含量低，而该亮的条带是指处理组组织可能含量高。我比较赞同你的后一种说法，但不知是什么原因，难道是非目的条带上的大量的酶消耗底物？还是什么其他解释？

• 00无名指00 (2014-4-13 01:12:40)

  
  还是推荐这个帖子，上面写得非常详细
  cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5936631&sty=1&tpg=1&age=-1')