【求助】总蛋白或者膜蛋白的提取步骤及MARKER的选择

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-4-13 01:50 作者: bring 来源: 分析测试百科网

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【求助】总蛋白或者膜蛋白的提取步骤及MARKER的选择

大家好，我是一名实验方面的新手，刚进实验室半个月。最近在提取蛋白，请问哪位大侠知道提取膜蛋白或者提取总蛋白的操作步骤及配液呢？或是有关这方面的网站也可以的，谢谢了！
我们要的蛋白质大概是150KD的，所以还想请问大家有谁了解哪个公司的MARKER不错，而且性价比合理一点呢，主要是高分子量的蛋白质标准。
有知道的战友可不可以及时回帖啊，或者发到我的邮箱可以吗？**。比较急的，谢谢善良的人了！

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sunnyB (2014-4-13 01:50:32)

不知道您提的什么组织。提取是在变性条件还是native条件。
一般在裂解液中加入detergent，如tween，triton等。然后辅以各种破碎方法。
至于marker，很多公司都有，可以选择买high range的marker
市井小民 (2014-4-13 01:51:08)

不知道您提的什么组织。提取是在变性条件还是native条件。
一般在裂解液中加入detergent，如tween，triton等。然后辅以各种破碎方法。
至于marker，很多公司都有，可以选择买high range的marker
bring (2014-4-13 01:51:30)

谢谢上面两位战友，我提取的是小鼠骨髓细胞的膜蛋白，昨天按RIPA裂解液的配方提取了，不知道行不行。
昨天向同学打听了，有三个公司的MARKER的质量和服务都是很不错的，TAKARA,INTROVEGEN,QIAGEN，所以计划订其中的某个。
我还想弱智的问一下，含有碳酸钠的电泳缓冲液可以用来跑电泳吗，会有什么影响啊，那天我配电泳缓冲液，调PH值的时候把NAOH误拿成碳酸钠了，因为配的是5×的电泳缓冲液，里面试剂的量都是很大的，所以就不舍得倒掉重配。但是如果影响电泳效果，还是要倒掉的，请哪位大侠帮我解答一下，好吗？
谢谢！
nvdabing (2014-4-13 01:51:55)

是SDS-PAGE吧，电泳缓冲液不用调PH值
不过即使加了碳酸钠我觉得影响不大，可以试试。
bring (2014-4-13 01:52:16)

QUOTE:
原帖由 nvdabing 于 2014-4-13 01:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

是SDS-PAGE吧，电泳缓冲液不用调PH值
不过即使加了碳酸钠我觉得影响不大，可以试试。
是SDS-PAGE,电泳缓冲液要求PH值是8.3的，所以要调的吧。Wink
ALALA (2014-4-13 01:52:35)

按照配方配是不用调pH的，配出来就是8.3
bring (2014-4-13 01:53:07)

QUOTE:
原帖由 ALALA 于 2014-4-13 01:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

按照配方配是不用调pH的，配出来就是8.3
哦，可能是我没配好，那天配完之后PH偏酸。谢谢！