最新更新主题

【求助】转膜转过了，怎么办

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-4-14 15:58    作者: 6327555    来源: 分析测试百科网

查看完整版本请点击这里：
【求助】转膜转过了，怎么办

分子量为42KD，0.8mA/CM2,转了大概70分钟，半干转，结果垫了双层PVDF膜，结果两张膜上都有预染MARK，这种情况下，要怎么办呀，这个膜还能用吗？
如果我下次再转，大概多少时间比较合适，麻烦大家建议一下
查看完整版本请点击这里：
【求助】转膜转过了，怎么办

我也来说两句 查看全部回复

最新回复

  • dog002 (2014-4-14 15:58:50)


    你的蛋白大约60min,就可以了.(或者再缩短时间)
    你可以两张膜都用丽春红S染色看看,那张膜有你的目的条带.

  • 6327555 (2014-4-14 15:59:08)


    1 .我认为50min就可以了

  • 6327555 (2014-4-14 16:00:26)

    会不会，蛋白在两张膜上都有？

  • 6327555 (2014-4-14 16:00:57)


    以前我一直是转90分钟，转的挺好的，不知道这两次为什么转70分钟就转过了，明明是相同的条件呀

  • xyw5 (2014-4-14 16:01:13)

    可能是你的转膜buffer不一致!

  • 6327555 (2014-4-14 16:01:30)


    唉。今天把转膜时间调为50分钟，预染MAKR都在膜上，我也认真检查了滤纸，没有预染MARK的条带。但是还是没有做出来，怎么回事呀？救命 呀。。。。。。
    一抗，二抗都是新的，昨天用同批蛋白做了另一个指标，证明蛋白OK，实在是想不出问题出在哪里，难道50分钟也转过了吗？
    分子量为42KD，0.8mA/CM2，有没有人做过，大概要转多久才合适呀

  • zhezhe (2014-4-14 16:01:51)


    转完膜的Gel,你染过色吗?
    你的究竟是转过了,还是没转上,你要考虑清楚.
    都不行,建议用两倍的电流转,30min,看看.

  • 6327555 (2014-4-14 16:04:47)


    可是我的预染MRAK都转上去了呀，为什么转移效率一下子变这么高，以前师姐她们也要转90分的呀

  • glass (2014-4-14 16:05:06)


    是不是MARK 加的量多了，Mark 转的很好的时候，目的条带转的不一定好，还有就是你胶的大小，不只与你的蛋白的大小有关还与胶的大小有关。

  • 6327555 (2014-4-14 16:06:36)

    我的MARK加的是5ul,胶是3*10.我的蛋白变性后放在-20度，冻溶过3次。
    会是蛋白降解了吗？但是如果是降解为什么另一个指标可以做出来？

  • XYZQ (2014-4-14 16:06:55)


    你换成50min了，可能是你的蛋白还没有转上。mark很容易转上的。不要以它转上为标准。
查看全部回复 我也来说两句
查看完整回复请点击这里：
【求助】转膜转过了，怎么办