【求助】BCA法蛋白定量

最新回复

• fox_79 (2014-4-14 16:45:51)

  
  先按1：10比例稀释试试看吧；
  标准曲线做两个，一个高的，一个低的～～～

• laughing妹 (2014-4-14 16:46:13)

  
  楼上的意思是不是稀释10倍呀？请指教

• fox_79 (2014-4-14 16:46:35)

  QUOTE:

  原帖由 laughing妹 于 2014-4-14 16:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  楼上的意思是不是稀释10倍呀？请指教

  是稀释10倍

• vivian4123 (2014-4-14 16:46:57)

  
  我们一般做的时候是取裂解完全的样品1微升，然后加49微升的双蒸水，将其混匀之后取20微升加到96孔板里面，接着就加入工作液了，37度孵育30分钟，用酶标仪于652纳米波长处测定吸光度值，这样做我们的效果挺好的，但是这个仅供你参考。我么做的是小鼠脑组织。你可以试试看，祝你好运，有问题我们再交流。

• vivian4123 (2014-4-14 16:47:22)

  
  改正：错了，波长是562纳米，不是652纳米，不好意思。

• tangxin_80 (2014-4-14 16:47:40)

  
  25微升

• laughing妹 (2014-4-14 16:47:59)

  那你测出来的蛋白浓度一般是多少？还需要将酶标仪上面的浓度×50换算回去吗？

• vivian4123 (2014-4-14 16:48:19)

  小鼠脑组织蛋白经过我们裂解后蛋白浓度大概是0.4-0.5微克/微升，然后乘50，即可得到原始裂解液中的蛋白浓度。

• laughing妹 (2014-4-14 16:48:41)

  今天我又做了次，碧云天的试剂盒，NanoDrop-1000核酸蛋白定量系统，结果为0.1~0.2ug/ul，蛋白浓度好低哟，不知道是蛋白丰度太低还是裂解液的问题？

• vivian4123 (2014-4-14 16:49:03)

  
  你的裂解液是自己配的还是购买的试剂盒？我们用的是碧云天的试剂盒，感觉效果还可以，不是给他做广告。另外，我们测定浓度时用的是TECAN的酶标仪，软件是magellan，用96孔板。可能方法不同结果也会有些偏差吧。

• laughing妹 (2014-4-14 16:49:20)

  
  我们也是买的碧云天的RIPA裂解液（中），但是蛋白浓度确实太低了，那是否应该考虑我的组织蛋白丰度低呢？

• jkobn (2014-4-14 16:49:38)

  
  我们自己做的是加10ul样品到200ul 的BCA试剂中，要求待测蛋白样品浓度在
  10－1200ul ，也有的说可以达到10－2000ul 的，样品中蛋白浓度不在此范围的应该稀释至该浓度范围，使其落在该法线性范围之内。样品浓度在不在该范围内可以通过对比标准曲线数值得知。要想测定准确的话最好待测样品也稀释几个不同浓度来测定

• huifeng0516 (2014-4-14 16:54:58)

  
  我们自己做的是加10ul样品到200ul 的BCA试剂中，要求待测蛋白样品浓度在
  10－1200ul ，也有的说可以达到10－2000ul 的，样品中蛋白浓度不在此范围的应该稀释至该浓度范围，使其落在该法线性范围之内。样品浓度在不在该范围内可以通过对比标准曲线数值得知。要想测定准确的话最好待测样品也稀释几个不同浓度来测定

• laughing妹 (2014-4-14 16:55:19)

  我也是这样做的，就是NanoDrop-1000这个软件在做标准曲线时只允许选5个点，我做了几次都不是很直，你有没有遇到这样的情况？