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【求助】2-D横纹？！

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-4-15 11:26    作者: yapuyapu    来源: 分析测试百科网

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【求助】2-D横纹？！

在电泳图中，3-10的胶条中，在碱性区有明显的拖尾，形象点，像蝌蚪似的。
分析可能原因：
1、胶条本身质量
2、聚焦过度还是聚焦不完全？
3、或者样品中有杂质？
还望有经验的朋友指教！
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最新回复

  • ffaa (2014-4-15 11:27:38)

    是杂质太多，如盐太多。聚焦没聚好，可适当增加去盐的时间
    祝好运

  • 3648755 (2014-4-15 11:28:04)


    使用纯化试剂盒即可

  • yapuyapu (2014-4-15 11:28:21)


    这张图是截取的一部分，是碱性端部分，左边为10，
    有一个很奇怪的现象，点的右边很光滑，而左边，也就是碱性端，有拖尾，为什么呢？为什么只是在左端聚焦不好？

  • vtongli (2014-4-15 11:28:43)


    是胶做得质地不够均匀？

  • 张先生 (2014-4-15 11:29:07)


    个人认为可能有以下几点原因供楼主参考：
    1．检查胶条是否快到保质期。我们实验室曾经发现，随着胶条存放时间的延长，碱性端的聚焦质量越来越不好。
    2．聚焦的伏小时数。我原来实验中3-10的胶条聚焦都用7万伏小时，后来，我师妹也用这个条件做另外一个样品，发现碱性端横纹多，后改为聚焦6万伏小时，就好很多了。LZ的聚焦伏小时数为多少？
    3．是否在聚焦后进行低电压维持。我曾尝试过，在完成聚焦后，用500V的低电压维持10-12小时，发现对酸性端具有更好的聚焦效果，而碱性段横纹明显增多。
    4．平衡是否充分，对DTT的去处是否完全。
    祝实验顺利。

  • yapuyapu (2014-4-15 11:29:31)

    相关疾病：
    脱水
    谢谢建议！
    后来仔细分析，聚焦结束后，在胶条的碱性端，胶很薄，估计是脱水造成的，进而导致蛋白在碱性端的聚焦效果差。
    我的聚焦是7万。后来增加聚焦时间，到8万多，效果好一些。

  • panda王 (2014-4-15 11:29:51)


    聚焦时间我都选择80000Vh,碱性端可用20mM DTT侵湿的paper wick处理一下能有明显改观,或者用1-2mM的TBP.

  • @花开花落@ (2014-4-15 11:30:22)


    最大的可能是盐过多或者重泡涨不够充分，导致聚焦效果不好
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