【求助】蛋白表达的疑惑

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• 小游abc (2014-4-15 21:15:23)

  
  的确，一般来说要是有表达，差别应该是不大的，
  我一般通常会挑两三个克隆同时试表达，偶尔会有些表达上的差异，但是都是量上有点差异，但是很少是有或无的差异。基本上不同的克隆在表达上基本上是没有差异的。
  你这种情况应该是存在污染了。
  建议做个pcrtest试试。

• duoduo (2014-4-15 21:16:53)

  还想问问污染是指什么样的污染呢？卫星菌落是不会的，因为我的转化后克隆长的并不多。

• vcve (2014-4-15 21:17:09)

  
  你有没有抽质粒验证？

• duoduo (2014-4-15 21:18:36)

  质粒是验证过的，然后转的BL21

• u234 (2014-4-15 21:19:08)

  
  理论上如楼上所说，但常常LZ所说的情况，可能的原因：
  1。如战友所说，有污染；
  2。在细菌传代过程中质粒丢失，甚至细菌本身有了抗性，不需要质粒也可以在含抗生素的培养基中生长；
  3。质粒拷贝数降低，原有抗性条件下已不能生长，最好先在没抗性、低抗性的平板上进行复壮！
  建议LZ只要有阳性克隆就往下做了，不表达再换一个，都不行了再复壮

• fqswdzd (2014-4-15 21:20:14)

  
  会不会有空载的可能，我之前表达的蛋白发现诱导后除了目的蛋白表达升高的同时，载体蛋白也多了，量还不少。

• october7 (2014-4-15 21:20:59)

  
  挑pcr鉴定阳性的克隆再作诱导表达,通常各个阳性克隆没有表达上的差异

• nikun230 (2014-4-15 21:21:25)

  
  不妨先做AGROSE电泳检测阳性克隆是否包含目的基因, 然后在诱导表达, 应该更可靠些.