最新更新主题

【求助】IgG蛋白纯度测定时的SDS-PAGE问题

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-4-17 14:37    作者: kulee    来源: 分析测试百科网

查看完整版本请点击这里：
【求助】IgG蛋白纯度测定时的SDS-PAGE问题

我过柱提纯人血清IgG蛋白后，要进行纯度测定，要跑SDS-PAGE,我应该用什么分子量的MAKER,是低分子量的还是搞分子量的，加样时应该注意些什么？请各位高手指点一下！跑电泳时，应该选用什么样的条件？
查看完整版本请点击这里：
【求助】IgG蛋白纯度测定时的SDS-PAGE问题

我也来说两句 查看全部回复

最新回复

  • zhenxin (2014-4-17 14:38:07)


    这个问题我以前回答过，见
    cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/9482687')
    IgG会出现两条带，25Kd和60几KD的轻链和重链，所以你采用低分子量Marker即可（最大97K的），分离胶浓度为12%，加样浓度不要太高，1ug足够了（如果你想看杂带，做个蛋白量梯度，反正有10个孔），电泳常规条件就可以了

  • ritou1985 (2014-4-17 14:39:08)

    人血清白蛋白也是免疫球蛋白的一种，分子量为150kDa，在SDS的作用下分解为两条重链和两条轻链，分别为50和25kDa左右的轻链和重链，这样就可以确定你的跑胶条件了

  • avi317 (2014-4-17 14:39:33)

    QUOTE:

    原帖由 ritou1985 于 2014-4-17 14:39 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    人血清白蛋白也是免疫球蛋白的一种，分子量为150kDa，在SDS的作用下分解为两条重链和两条轻链，分别为50和25kDa左右的轻链和重链，这样就可以确定你的跑胶条件了 ...
    楼上这个是错误的说法
    白蛋白是白蛋白，球蛋白是球蛋白
    白蛋白分子量是60kd左右，比如人的白蛋白叫HSA,牛的叫BSA

  • kulee (2014-4-17 14:40:06)


    请大家帮帮忙看一下，只是我刚提的IgG蛋白跑的PAGE，请大家帮我分析一下，是不是纯度不好，最右边的是蛋白maker,低分子量的

  • summerxx (2014-4-17 14:40:26)


    1.抗体纯度不是太好，一般用Protein A or G纯度可达90%以上。
    2.电泳没有跑好，从Maker上也可以看出，下面的挺浓的条带应该是抗体的重链，60多kd！建议改凝胶浓度！

  • kulee (2014-4-17 14:40:47)

    我用的是DEAE-A50离子层析介质，纯度能达到多少？
    我下次是不是应该用12%的分离胶跑？

  • summerxx (2014-4-17 14:41:10)


    纯化纯度要看你的纯化条件的，不能一概而论！可以用12%的分离胶！
查看全部回复 我也来说两句
查看完整回复请点击这里：
【求助】IgG蛋白纯度测定时的SDS-PAGE问题