【求助】40KD的蛋白western怎么与内参分开

最新回复

• bling (2014-4-19 10:23:20)

  β－actin的内参可以改为β－Tubolin分子量为55KD左右较好,我用的是博士德,效果很好
  是单抗

• seven7 (2014-4-19 10:23:40)

  
  你好，谢谢哦，我想问一下，你这个大概价格是多少呢？

• yonger (2014-4-19 10:24:01)

  
  那就改成先杂一个后杂一个~

• lxh031 (2014-4-19 10:24:18)

  我觉得楼主最好还是看看老外用什么内参为好，否则做出了东西投稿人家不承认就麻烦了。

• 喇叭花 (2014-4-19 10:24:41)

  那就改成先杂一个后杂一个~
  
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  请具体说一下可以吗？谢谢了

• avi317 (2014-4-19 10:25:10)

  常用的内参有b-actin，GAPDH。一般我们选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上。因此你要知道你检测的蛋白的分子量来选择合适的内参！
  GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。在WESTERN中，分子量为36kDa左右。
  近2-3 年，更详细的研究发现，β-Tubulin (球管蛋白)， 而不是Actin，才是在不同的组织细胞中普遍等量表达的蛋白， 因而逐渐取代Actin， 被广泛应用于Western Blotting，作为equal loading control (等量蛋白上样内参)，β－Tubolin分子量为55KD左右。
  所以建议使用这两种内参看看！祝实验顺利！

• yjf1026 (2014-4-19 10:25:34)

  我来帮个忙，先杂你的目的条带或者内参，建议先杂内参（除非急于得到结果），一来可以看看电泳和转膜的情况，二来可以看看内参的量，常规二抗-曝光-显影之后，用抗体剥离液将杂在膜上的抗体去除，重新杂目的蛋白，之后再曝光显影，最后将两者叠加起来即可。这样可以避免你说的情况。
  如果你的蛋白本来丰度较低，还是建议先杂目的条带，因为第二次杂的肯定没有第一次敏感。

• seven7 (2014-4-19 10:25:58)

  
  谢谢各位战友，我这个目的蛋白跟GADPH跑开了呵呵，嘿嘿

• PINK (2014-4-19 10:26:22)

  我来帮个忙，先杂你的目的条带或者内参，建议先杂内参（除非急于得到结果），一来可以看看电泳和转膜的情况，二来可以看看内参的量，常规二抗-曝光-显影之后，用抗体剥离液将杂在膜上的抗体去除，重新杂目的蛋白，之后再曝光显影，最后将两者叠加起来即可。这样可以避免你说的情况。
  如果你的蛋白本来丰度较低，还是建议先杂目的条带，因为第二次杂的肯定没有第一次敏感。
  
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  请问 抗体剥离夜是何物，如何配置？

• taoshengyijiu (2014-4-19 10:26:43)

  
  呵呵,也可以分开跑!