【求助】收集细胞后能否存放一段时间再提蛋白？

最新回复

• glass (2014-4-19 11:09:44)

  
  会有一些影响
  不知你是怎么将细胞冻在-80度的，如果直接从室温移至-80度，快速的降温可能会形成冰晶，导致细胞内部结构破裂，给你以后的质核分离带来困难。
  如果你用细胞冻存那样的慢冻方法，则细胞仍保持活性，但不能保证细胞内蛋白的水平不发生变化。

• ztonyc (2014-4-19 11:10:04)

  
  完了,我是直接放到-80度里面的,因为想不必要保持细胞的活力,所以就直接放进去了,看来这次要失败了.

• glass (2014-4-19 11:10:26)

  也不一定会失败的，你先试试吧。

• flower-201 (2014-4-19 11:10:57)

  
  也不一定会有大影响。
  曾经这样做过，对实验结果没什么影响，楼主还是不要灰心，做做看。

• 131415 (2014-4-19 11:11:16)

  
  应该没问题，可能跟不同细胞有关，我以前帮师兄收获原代培养海马细胞，直接放-80度，几个月都没问题。

• any333 (2014-4-19 11:11:53)

  期望若干天后看到楼主，用胞浆裂解液做核蛋白内参H1或H3的结果。
  我做过，会有部分核溶解后释放到胞浆，但当时我使用了液氮研磨（反复冻融＋机械破碎），也引起部分胞核提前破裂的。所以不能完全说明是－80度冻融的作用。
  建议你先用电动匀浆机匀浆组织，这样可以确定－80度冻融影响到底有多大。

• ztonyc (2014-4-19 11:12:13)

  
  今天提了一下，不过完全失败。
  没有用RIPA来提，在园子里找到的方案，自己配的裂解液。加Buffer B后，沉淀不溶，反复吹打也不行，后来有人叫我用液氮反复冻融，还是不行，我就拿去超声破碎，结果别人告诉我，这样把核都碎裂了，核蛋白就提不出来。我那个郁闷。
  我想我现在应该提的是总蛋白，但是用的是提核蛋白的配方，用了Buffer A和B，等于裂解了两次，都不知道蛋白还有没有了。唉～～我的细胞还比较珍贵，今天真不是一般的郁闷，早知道直接提总蛋白算了，搞半天核蛋白还是没提成功。