【求助】忘记封闭，再用原来的PVDF膜封闭一次...

最新回复

• yapuyapu (2014-4-19 22:27:38)

  
  忘了封闭，你的膜应该背景一塌糊涂了！
  没有结果，请分别检查你的一抗、二抗和显色液是否有问题！

• boom (2014-4-19 22:27:57)

  
  一抗、二抗、显色液可以保证没问题。
  我是想知道是否可以把膜重新封闭，再继续做。
  谢谢

• yapuyapu (2014-4-19 22:28:15)

  封闭是用BSA与膜上的未结合蛋白的部分结合，从而避免一抗与膜的非特异结合。如果你的试剂都没有问题，那你没有封闭直接加一抗，一抗可以结合到整张膜的各个位点，最后再加二抗，显色时就会是整张膜都显色，不可能说没条带。所以觉得你的试剂应该有问题。

• yyaxw84 (2014-4-19 22:28:48)

  要用一抗、二抗去除液处理PVDF膜，然后再重新封闭和标记。
  去除液碧云天有现货，自己也可以配。

• 7437654 (2014-4-19 22:29:08)

  
  加了一抗、二抗，结果条带没出来.检查你的一抗、二抗和显色液是否有问题.你可以再重新封闭，加一抗过夜.

• yapuyapu (2014-4-19 22:29:38)

  
  首先，楼主应该仔细考虑一下为什么在没有封闭的情况下，没有曝出条带？这个结果说明你的步骤中肯定有哪个地方有问题。
  其次，如果查出并排除了问题，确认不是转膜的问题的话（因为如果转膜不成功，那杂什么也没用哈），用TBST洗过夜，再重新封闭，杂一抗、二抗，曝光。
  可以不用去除液，但不能保证背景完全干净。

• 大尾巴 (2014-4-19 22:30:00)

  
  感觉应该是一片白才对呀~~~