【求助】请问大家为什么聚焦的时候电压总是升不上去?

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-4-19 22:31 作者: tewank 来源: 分析测试百科网

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【求助】请问大家为什么聚焦的时候电压总是升不上去?

我做的是7cm的胶,聚焦时用的是4000v线性,每次到这一步电压就很难升上去,改成4000v快速就会很快升上去,不知道快速升压对聚焦有没有什么影响,谢谢大家!

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wanglaoshi (2014-4-19 22:31:25)

我都是线性升压到4000,在快速升压4000进行聚焦.不明白你的是什么原因.我想应该影响不大吧
kulee (2014-4-19 22:31:44)

你那样一开始就用快速,有时候会烧焦胶条,一般是先线性到4000,然后在快速聚焦.
tewank (2014-4-19 22:32:10)

谢谢了,我还想问下大家如果电压升不到目标电压你们都怎么处理的呢?
daod (2014-4-19 22:32:26)

一般达不到预设电压主要是因为盐浓度，两性电解质浓度或其他在职成分的干扰。
建议先除盐。或选用GE的clean up kit。
注试验顺利。
tewank (2014-4-19 22:33:00)

谢谢！我的样品是大鼠的脊髓,匀浆后离心取的上清夜,GE的clean up kit可以用吗?会不会使样品降解呢,有没有其他的可以除盐的,比如超速离心管或者透析什么的可以用吗?
pou (2014-4-19 22:33:18)

你在高电压聚焦以前可以先设置2个低电压除盐
pou (2014-4-19 22:33:34)

对了，提醒大家，如果什么办法改进后都还上不去，要怀疑一下你的聚焦槽！因为我遇到过这种情况呢！就是一直跑得很好的条件，突然后来就不行了，还好当时同时上了几个槽，大部分槽都跑出了结果，但有个槽的就没法聚焦（观察溴酚兰只跑到一半的位置，SDS-PAGE图染出来后蛋白也只分离到那个pH位置，后面就是模糊一片了）。后来又有同学用了那个槽，也遇到同样的情况。所以怀疑槽的电极在经常的刷洗后有变形了，接触不良引起。也可能是其它原因吧。
所以你不妨换个槽跑吧，说不定会有意外的结果哟。祝你好运！
qqq111 (2014-4-19 22:33:51)

请问两性电解质会不会影响升压？
同一种样品，pH5-8的胶条电压可以顺利升上去
但pH3-10的就升不上去
会是两性电解质的原因吗？
tewank (2014-4-19 22:34:36)

我也想知道到底两性电解质对聚焦的影响有多大，样品裂解液和水化液bio-lye量是不是要算在一起，以最终的量来算呢？谢谢大家！
二丫头466 (2014-4-19 22:35:16)

QUOTE:
原帖由 tewank 于 2014-4-19 22:34 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

我也想知道到底两性电解质对聚焦的影响有多大，样品裂解液和水化液bio-lye量是不是要算在一起，以最终的量来算呢？谢谢大家！
个人认为，两性电解质的作用是在聚焦时防止因正负离子聚集在两极而使蛋白溶液中缺少离子从而使蛋白沉淀，因此加入两性电解质，使蛋白质周围始终保持双电层和水化层。所以，我在样品裂解液中就没有加两性电解质，而仅在上样缓冲液中添加了两性电解质，感觉效果还不错。电流在16.17uA左右，电压能够升到10000V。