【求助】怎样提高SDS凝胶电泳上样蛋白量

最新回复

• 7437654 (2014-4-21 15:22:59)

  
  你可以先把蛋白浓缩一下，再上样的。

• guagua (2014-4-21 15:23:18)

  
  WB可以检测10－100pg的蛋白，通过系统优化，比如在不引起背景提高的情况下提高抗体浓度，增加孵育时间（4摄氏度），使用ECL，使用hyperfilm底片（Amersham公司），增加曝光时间等，一般都可以做的出来。
  如果实在不行，你可以先用免疫沉淀的方法富集c－kit，然后再作WB。
  当然这时你得做一个抗体的梯度，以证明所有的抗原都被沉淀下来.
  这样的结果，Nobody comlain.

• nn255 (2014-4-21 15:23:36)

  浓缩下试试，浓度提高

• yonger (2014-4-21 15:23:56)

  是用厚的胶板，可以增加上样量，调整抗体浓度，增加曝光时间，使用可以检测飞克级别的ECL，估计可以得

• hold住 (2014-4-21 15:24:12)

  今天第一次提DNA,电泳有结果,真高兴.明天做PCR跑电泳.试剂都是师兄们买好的.呵呵

• IAM007 (2014-4-21 15:24:46)

  
  是用厚的胶板，可以增加上样量，调整抗体浓度，增加曝光时间，使用可以检测飞克级别的ECL，估计可以得
  怎样的厚胶板呢？1.0mm和1.5mm的最大上样量是一样的，因为相对1.0mm的 梳子而言，1.5mm的梳子齿厚，但是短很多。

• kewanqi2011 (2014-4-21 15:25:07)

  
  你可以用三氯醋酸沉淀法来浓缩一下你的蛋白溶液，用这个方法所需的最低蛋白浓度是5ug/mL。也可以使用脱氧胆酸盐三氯醋酸沉淀法，这是三氯醋酸法的一个变通形式，它可以用于浓度为1ug/mL以下的蛋白质浓缩。注意的是脱氧胆酸盐三氯醋酸法不能在含有sds的条件下使用。

• 3648755 (2014-4-21 15:26:24)

  
  用酒精也可以浓缩一下：
  加两倍体积的酒精，－２０度１小时，１００００转离心１５min，除去上清，再干燥掉酒精，加相应体积的缓冲液。