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【求助】细胞蛋白提取问题？

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-4-26 20:35    作者: redbutterfly    来源: 分析测试百科网

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【求助】细胞蛋白提取问题？
做药物处理以后细胞凋亡相关蛋白的检测，我的细胞是贴壁的，需要将培养基中存在的死细胞一并收集，我应该怎么收集这部分细胞呢？
药物对细胞抑制率不是很高（30%左右），若将培养基吸出离心，多少转速适合？麻烦各位给我支支招，谢谢！
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  • 喵咪 (2014-4-26 20:35:28)


    1800转可以

  • redbutterfly (2014-4-26 20:35:50)

    还有个问题？作为对照，不加药物处理的，是不是应该不要让它长的过满？否则检测时也会有凋亡相关蛋白的表达，起不到对照作用
    望各位指教

  • jingling845 (2014-4-26 20:36:13)

    我实验过程中也遇到这个问题，结果做的不理想，有没有高手解答一下？

  • zhenxin (2014-4-26 20:36:34)


    正常细胞也有一定的凋亡的，但跟给药刺激的会有显著性的差异。
    对照组和给药组的细胞在加药前都不应该长得太满，理想状态是长到80%的程度。最重要的是给药和对照组细胞量要一致。

  • redbutterfly (2014-4-26 20:37:39)

    我还有个问题，如果只长到80%，所提蛋白浓度会不会偏低？如果我要检测的目的蛋白丰度本身在细胞中就不高，这该怎么办？你们是如何提高蛋白浓度的？

  • gogo (2014-4-26 20:39:04)

    可以用富集细胞的方法啊，比如说要是用培养瓶养的话，可以先在一个培养瓶中加入培养基吹打细胞，然后将吹打下来的细胞连同培养基吸入另一培养瓶中吹打下来此瓶的细胞，可以连续操作，这样的话就不用担心细胞的数量少了，然后再加入适量的细胞裂解液（理论上加的裂解液的量越少，后来得到的蛋白浓度越高，但是不能太少，否则会造成细胞裂解不充分和蛋白的降解）。

  • redbutterfly (2014-4-26 20:39:25)


    好！非常感谢楼上的回答，后面按照你的方法提一次，还想问一下，两瓶50ml的细胞用裂解液不少于多少？
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