【求助】考染（蛋白定量）遇到的问题

最新回复

• yapuyapu (2014-4-26 23:07:10)

  
  首先，不太认可你的推断，基本上不太可能。考法对于极低蛋白浓度的样品测定时，的确线性不好，但是应该不会低于空白值。
  考法的工作液应该是红棕色，pH应该在1以下，请确定无误。
  还有就是看看分光光度计是不是要换灯了，还有就是请维修的帮忙调一下光路，有时候灯的能量低或是光路不正也会使测试结果出现偏差。

• ladyhuahua (2014-4-26 23:08:46)

  谢谢你的建议
  考法工作的流程我们都认真遵循了
  不能排除试剂影响，
  仪器可能也出现问题，但已经调试过了，应该偏差不大。
  最主要的是为什么会出现做对照的纯染料溶液吸光度比部分加了蛋白的液体的吸光度 反而要高 这一现象
  只是部分哦，蛋白浓度高的溶液吸光度还是高于纯染液的

• ladyhuahua (2014-4-26 23:09:41)

  
  我们使用的实验配方是这样的：
  考马斯亮蓝G-250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，雍蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W /V）考马斯亮蓝G-250,4.7%（W/V ）乙醇，8.5%（W/V ）H3PO4。
  PH值低于1的 不是强酸么
  按照这个实验方法达不到要求吧。

• zzzz (2014-4-26 23:10:15)

  
  估计你是在测了高浓度标准蛋白后,又测的对照是吧,如果这样的话,就是你的杯子没有冲洗干净,因为上一个样品会有残留,所以我们一般 都是先低后高.

• ladyhuahua (2014-4-26 23:10:33)

  这个没理由啊，
  我们测了很多次的，
  象这种现象出现不是1 2次，
  残余可以不考虑的，因为我们试验还是很认真的，
  试剂不咋地，但仪器还是进口的。
  

• ladyhuahua (2014-4-26 23:11:16)

  最近我们卖出去一个BCA试剂盒
  也出现了类似的问题
  标准曲线存在，但是第一第二个值是负值

• greenbee (2014-4-26 23:12:48)

  蛋白或者水是否是冰的？
  在室温平衡一下再测看看。
  我们发现，从冰箱拿出的蛋白溶液测浓度都是负值，室温放置一下再测就可以了。可能是温度低温差使比色杯蒙雾

• avi317 (2014-4-26 23:13:05)

  
  用考马斯亮蓝测蛋白，最适宜的条件应该是室温24度以上，反应时间3分钟以上才达到稳定。