【求助】SDS-PAGE呈笑脸状,为什么?

最新回复

• yonger (2014-5-06 18:10:39)

  
  可以考虑换用新的缓冲液。
  因为你的marker还不错，可能是样品处理问题，样品加足量的loadingbuffer，具体的量，最好使样品完全溶解，上样前离心。

• wawa (2014-5-06 18:11:01)

  
  1.微笑"是因为灌胶的时候冷却不均匀，中间部分冷却不好，导致凝胶中的分子有不同的迁移率所致。这种情况在较厚的凝胶以及垂直电泳时常常发生。“倒微笑“也称“皱眉”现象常常是由于垂直电泳时电泳槽的装置不合适引起的，特别是当凝胶和玻璃板组成的三明治底部有气泡或靠近隔片的凝胶聚合不完全便会产生这种现象
  2.书上说出现“微笑”是因为整个胶冷凝的不均匀，中间部分和两端受热不一样而致成了“倒微笑”可能是因为两端的胶凝的不好，加APS和TEMED后应该混合均匀。
  3.样品中盐浓度过高,点样量太多或每孔点样量不均匀,电泳电压不稳定或过高

• vivian4123 (2014-5-06 18:12:36)

  
  我老板说，这个是由于受热不均造成的,自己配的PAGE胶必然存在这个问题.用预制胶就没有这个问题了.因为预制胶中加了某些未知成分,而这个成分一些做预制胶的大公司都知道,就是不告诉我,也不告诉你.

• 987789 (2014-5-06 18:13:05)

  你跑的是上清还是菌体？
  如果是上清，那么你的蛋白量减少试试；如果是菌体的话，要先煮样，上样前要离心，去上清去跑。

• qumm1985 (2014-5-06 18:13:22)

  
  非常感谢!
  我也觉得是胶凝固的不好.

• 小游abc (2014-5-06 18:14:34)

  我老板说，这个是由于受热不均造成的,自己配的PAGE胶必然存在这个问题.用预制胶就没有这个问题了.因为预制胶中加了某些未知成分,而这个成分一些做预制胶的大公司都知道,就是不告诉我,也不告诉你.
  
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  请教，何谓“预制胶”？

• wmp1234 (2014-5-06 18:14:56)

  
  建议你把胶放到4度跑，或者放到一个盆里，四周堆满冰，这样会好点

• gogo (2014-5-06 18:15:23)

  你跑的是上清还是菌体？
  
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  如果是上清，那么你的蛋白量减少试试；如果是菌体的话，要先煮样，上样前要离心，去上清去跑。
  请问一下,离心后是加上面的还是加下面的啊?

• qumm1985 (2014-5-06 18:16:03)

  
  我认为是上样量太多了,适当减少上样量能改善情况的,试试吧

• moonlight45 (2014-5-06 18:16:22)

  
  样品除盐没除干净，可以用小超滤杯超滤一下，加点低浓度的buffer。然后跑个上样梯度摸索一下上样量。我也遇到过这种问题。