【求助】细胞胞浆蛋白就是总蛋白吗?

最新回复

• ztonyc (2014-5-07 11:16:37)

  
  胞浆蛋白不是总蛋白，而是总蛋白减去膜蛋白，核蛋白剩下的。顾名思义。
  一般提蛋白中，总蛋白通常是说的膜蛋白和胞浆蛋白，如果要提到核蛋白，会单独列开提

• ha111 (2014-5-07 11:17:29)

  先谢谢ztonyc的指点,我这里还有个问题:
  谁能提供提取细胞总蛋白的方法吗?还是说膜蛋白和胞浆蛋白分开提取出来后再混合????

• 小糖块 (2014-5-07 11:17:50)

  
  加细胞裂解液处理得到的可溶性蛋白就认为是细胞总蛋白。不需要分别提取再混合

• cj_mondy (2014-5-07 11:18:17)

  我预提取细胞株总蛋白,查阅相关资料显示有胞浆蛋白和膜蛋白的提取方法,请问哪位大侠能告诉我,胞浆蛋白就是总蛋白吗?或者胞浆蛋白和膜蛋白才统称为总蛋白?
  
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  总蛋白包括胞浆蛋白、胞膜蛋白和胞核蛋白。以下是有关细胞总蛋白的提取以及裂解液的配制的操作方法，希望能够对你有用。

• changlhsyo (2014-5-07 11:18:49)

  总蛋白提取最简单的方法就是裂解液直接裂解细胞（或加入超声）

• ha111 (2014-5-07 11:19:18)

  
  裂解液配方呢???谁能提供?我查到的好象是分开提的配方

• ffaa (2014-5-07 11:19:50)

  我预提取细胞株总蛋白,查阅相关资料显示有胞浆蛋白和膜蛋白的提取方法,请问哪位大侠能告诉我,胞浆蛋白就是总蛋白吗?或者胞浆蛋白和膜蛋白才统称为总蛋白?
  
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  胞浆是指Cytosol,严格的讲，是指细胞质（cytoplasm）除去细胞器的部分,因此不仅不包括核与细胞膜，而且不包括线粒体、内质网等细胞器
  不过这是针对细胞学说的，对于生化研究习惯上把细胞质除去核的部分叫做胞浆，公司卖的Cytosol protein kit也是只把细胞核去掉而已
  胞浆蛋白显然不是总蛋白
  如果你是做蛋白质组研究或纯化未知蛋白的话，最好把不同区域的蛋白分别提取
  如果只是做western看看特定蛋白，直接把整个细胞裂解上样即可，这时其实是“whole extraction” 或“whole lysate” ，除了总蛋白，还有其他非蛋白的杂质
  最简单的办法是把细胞放在SDS-PAGE电泳缓冲液里煮沸，上样
  不过不是适合所有细胞
  一般的手册上都有很多这类配方

• ha111 (2014-5-07 11:20:19)

  提取总蛋白可以用RIPA或者NP-40 buffer,前者使用更多。
  RIPA buffer:
  50mM Tris HCl pH 8
  150mM NaCl
  1% NP-40
  0.5%sodium deoxycholate
  1%SDS
  2mM EDTA
  NP-40 buffer
  20mM Tris HCl pH 8
  137mM NaCl
  1% NP-40
  10%glycerol
  2mM EDTA