【求助】听说有些公司的一个技术人员，一周可以表达...

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• yjf1026 (2014-5-07 11:48:15)

  
  我不信有这样的人!除非他的实验有很多人一起在做各有分工,
  且都加标签,再就是不要求太高的纯度,(我纯化的蛋白跑电泳目的蛋白有手指那么粗了,只有一条头发丝那样的杂带结果被定为纯度90%,而有的公司介绍其胶好用说是90%的纯度结果一看......在我们这连70%都算说多了!)当然也看他纯化的目的了!
  总之一周5天出十几个,我不太信,如果有我一定拜他为师(这是真心话)!希望我说的话没损害到那牛人的颜面!如果您是那牛人!请给我e-mail,我给您当学徒(只要您带我),一年内我不要工资!真的!我想在纯化方面有所提高!

• any333 (2014-5-07 11:49:18)

  
  怎么说呢，如果是原核蛋白的话，一周体纯十个蛋白是没有问题的，尤其是用pet28、ni柱体纯的话，但是真核细胞本身就不容易表达，有时一个月也未必提的出来，也很正常的啊。
  所以情况不一样，没有什么了不起的啊。

• 兔纸 (2014-5-07 11:49:47)

  QUOTE:

  原帖由 any333 于 2014-5-7 11:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  怎么说呢，如果是原核蛋白的话，一周体纯十个蛋白是没有问题的，尤其是用pet28、ni柱体纯的话，但是真核细胞本身就不容易表达，有时一个月也未必提的出来，也很正常的啊。
  所以情况不一样，没有什么了不起的啊。 ...

  问题是即使在原核表达也要有表达，表达不出来怎么纯化？难道每个蛋白在原核中都可以表达？他这么厉害？真想去那个地方学习！请教pet28很好用吗？谢谢！

• 兔纸 (2014-5-07 11:51:03)

  QUOTE:

  原帖由 yjf1026 于 2014-5-7 11:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  我不信有这样的人!除非他的实验有很多人一起在做各有分工,
  且都加标签,再就是不要求太高的纯度,(我纯化的蛋白跑电泳目的蛋白有手指那么粗了,只有一条头发丝那样的杂带结果被定为纯度90%,而有的公司介绍其胶好用说是 ...

  
  就算他7天表达纯化10个好了，也是很牛的。要是我是那个牛人，就不用受气了！谢谢！顺便问一下，您纯化蛋白用什么标签，怎样才能达到您讲的90%，我过镍柱达不到这种效果。

• kuohao17 (2014-5-07 11:51:25)

  
  嘿嘿,其实要说10来个带标签纯化的话,那应该是可以的,因为跑一个柱子其实差不多需要1-2小时即可,所以大家可以算,公司的情况不一样,因为他们遇到做不出来可以放弃换下一个,不和做课题一样非做这个不可以,何况公司确实是有分工,做纯化只管做纯化,检测,表达等都不是他做的.如果机器好,人专业,一天跑柱子跑个5-10趟也不难.当然要求不同,那进度也不同,更何况离心柱或者直接填料和样品混合的纯化,一天做10来个这样的实验也不难.
  运气好,什么都不难.但是我也遇到过难的,三人一组,只做纯化,做一个纯化工艺整整做了三个月,有的甚至更长.因此你老板当然不很了解纯化的难度,有的人以为纯化很简单,其实越了解它就觉得越难,没做是很难预先知道结果的.

• remonte (2014-5-07 11:51:42)

  
  分工，纯度要求不高，比较好表达的，十几个不难。你不能单纯比个数，影响因数太多，比较没什么意思

• JK.jon (2014-5-07 11:52:09)

  QUOTE:

  原帖由 兔纸 于 2014-5-7 11:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  
  问题是即使在原核表达也要有表达，表达不出来怎么纯化？难道每个蛋白在原核中都可以表达？他这么厉害？真想去那个地方学习！请教pet28很好用吗？谢谢！ ...

  一般来说，原核蛋白在大肠杆菌中都会表达的，例外的不多，而且很多是胞质表达，如果带了his标签（如pet28）还是比较容易的。
  pet28很好用，第一表达比较容易，其次纯化很简单，非常适用于大规模的蛋白筛选、表达、纯化。