【求助】我的一抗是鼠IgG1，做ＩＰ应该拉下来...

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-5-08 15:20 作者: sunnyB 来源: 分析测试百科网

我的一抗是鼠IgG1，做免疫共沉淀，用珠子拉下来后，跑电泳，是不是应该出现IgG1的重链和轻链两条链那．但是我总是出现有４条带．有５５＼２６＼２０＼５０等条带．不知道是怎么回事？郁闷那，紧急求救．做了好多次只出现这些条带，就是没有自己的目的条带．我的目的条带是３６ＫＤ左右的．

ritou1985 (2014-5-08 15:20:43)

可能的几种原因分析如下：
1.实验失败，重新做。考虑实验方法有没有问题，抗体选择是否合适，注意不是所有的抗体都可以做IP。
2.你的目的蛋白是否发生了修饰，导致分子量变大。
3.你的目的蛋白是否是由几个亚基组成，后期处理过程解离了。
4.我不知道你做的是IP还是CO-IP，这两个是有区别的，所以你的目的蛋白到底是什么？抗体对应的抗原还是与抗原相互作用的蛋白？
sunnyB (2014-5-08 15:23:11)

谢谢楼上的,.我用SANTA的抗体,明确说可以做IP,
目的蛋白是PCNA,应该是没有修饰的,
我做的应该是CO-IP吧,就是看看,PCNA和细胞中的哪些蛋白相结合了,应该拉下很多条带才对,但是我几乎每次都没什么条带,只用PBS洗3次都拉不下来条带,好郁闷那.
04906 (2014-5-08 15:23:34)

说清楚一点，什么“鼠IgG1”？大鼠小鼠，单抗多抗？目标组织来自什么？二抗抗什么？
04906 (2014-5-08 15:24:22)

还是没有说清楚，你做IP用的是什么抗体？做WB又是用的什么抗体？两种抗体的种属来源是不是一样？有没有目的蛋白？
如果你要看看所有跟PCNA结合的蛋白的话，不是做WB，用质谱吧。
sunnyB (2014-5-08 15:25:13)

我做IP的话,没有二抗只有一抗和珠子,然后跑电泳,然后银染,做质普,找相互结合的蛋白.