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【求助】前天跑了张17cm的胶,看着点不多,why?
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17cm的胶,pH4-7,
聚焦60000vhours,
第二向16mA1hour,24mA2.5hours
考染!
为什么点不多呀?二向是不是跑的时间太短了?
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【求助】前天跑了张17cm的胶,看着点不多,why?
69037793.jpg
字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-5-08 15:42 作者: cbou876 来源: 分析测试百科网
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最新回复
喵咪 (2014-5-08 15:43:30)
loli (2014-5-08 15:43:58)
plaa (2014-5-08 15:44:40)
看你样品可以选择3-10的胶条,没什么太严重的蛋白聚集区!·
但条件要优化!聚焦肯定不好!
看你蛋白点也不规则,样品是新制备的么?若不是最好要保存-80度!
考染的点不少了,就是看着不舒服!在好好查以下原因。
银染怎么样?
cbou876 (2014-5-08 15:45:02)
以前跑过3次7cm的胶,这是第一次跑17cm的大胶,没有经验,所以还要各位站友帮忙,看看还需要做哪些优化!这里先谢谢了。
cbou876 (2014-5-08 15:45:57)
对了,我们实验室没有扫描仪,这张图像是用Chemidoc XRS拍的,特不清楚!头都大了:(
utt0989 (2014-5-08 15:46:16)
和上量没关系,我一直都用50微克,最少用过20几微克的一点问题都没有。不要浪费标本。几点建议,1,胶再做得好一点,2,细胞裂解液是否过期?3,平衡液Buffer是否过期?
is2011 (2014-5-08 15:46:39)
二向才3.5个小时,这么快?!汗呀,我们这里一般都是40mA要跑4个小时了.
cbou876 (2014-5-08 15:47:09)
谢谢几位站友的指点。
配置的水化buffer和平衡buffer可以保存多久呢?
glass (2014-5-08 15:47:35)
感觉你的蛋白量好像不是很多。你的蛋白浓度测的准不准啊,你一向上样时速度尽量要快点,温度高了蛋白容易讲解,当天夜里补充覆盖油了吧。再者一向转二向时胶条和分离胶一定接触紧密,排除气泡,否则点也会比较少。你的二向时间太短了,新配置的缓冲液跑的会快些。最好跑5个小时以上。点会跑的更开些.
qqq111 (2014-5-08 15:48:01)
感觉还可以的啊!可以做个3-10的,再银染看看。有些点可能考染染不出来。
木槿 (2014-5-08 15:48:19)
我也站成事定量的问题
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