【求助】等电聚焦电压升不上去

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-5-08 15:52 作者: S6044 来源: 分析测试百科网

我使用TCA-丙酮法提的全蛋白，可是为什么聚焦时电压升不上去，是不是盐离子浓度过高，我应该怎样去盐？一般除盐的方法有将样品用丙酮沉淀，而我的样品本身很就是用丙酮沉淀得到的，这是为什么呀？亟盼恢复

kuaizige (2014-5-08 15:53:03)

用2D clean up试剂盒处理一下
ending (2014-5-08 15:53:24)

理论上只要时间足够长,盐离子就会跑到两端而被除去.建议增加聚焦时间.我曾经聚焦24h,最终13000vh,也没什么关系.但正常情况下6000vh足够了 (17cm IPG).
ending (2014-5-08 15:53:42)

丙酮沉淀后样品一般不会含什么盐离子.是不是你的上样缓冲液有问题啊.我们用完全无盐配方,也没加TRIS
S6044 (2014-5-08 15:54:59)

我使用裂解液裂解样品直接上的样，裂解液配方：7M尿素，2M硫脲，4%chaps,1%DTT,2%两性电解质。我的硫脲是国产的，不知影响大不大？
S6044 (2014-5-08 15:55:16)

能不能说一下你的无盐配方是什么吗？
leifengta (2014-5-08 15:55:36)

2%两性电解质!!!浓度太高了,电压肯定上不去了
S6044 (2014-5-08 15:55:56)

有没有可能是试剂的问题呀/我的尿素是美国进口分装的，在常温就能溶解500g 50 元，两性电解质是伯乐原装的，只是硫脲问了几个试剂公司没有进口的，只能用国产的。chaps不知大家都用的是原装的还是进口分装的，影响大吗？
04906 (2014-5-08 15:56:14)

acetone沉淀本来就可以去除无机盐及致类等
另外clean-up kit 本来就是TCA/acetone啊？