【求助】大家用半干转时，不同分子量都各用多少时间呢？

最新回复

• wmp1234 (2014-5-08 17:29:25)

  
  我一般用恒流转的，跟据我的经验，30kd以下的蛋白是会转过膜的，所以要控制时间,一块1.5mm的胶，100ma，30min以内，
  30－50kd，100ma,45min
  50-80kd,100ma,1h
  80-100kd,150ma,1h
  >100kd,150ma,1.5h
  两块胶的话，电流加倍，时间不变

• INK (2014-5-08 17:31:54)

  
  相关疾病：
  头痛
  昨天做82kD的蛋白，用的是10V，转了35min。用考染染胶30min发现条带非常少，今天做检测没有发光，用丽春红染膜也发现条带非常少，几乎看不清。
  不知道是不是上样量少（20ug）还是转膜时间过长呢？
  头痛啊

• birdfish (2014-5-08 17:32:49)

  
  半干转六一的
  统一是150mA 恒流
  10--90 40分钟
  90--120 50分钟
  其实一般转45分钟都没问题

• birdfish (2014-5-08 17:33:16)

  
  你最好买点欲染mark试几次就知道了
  其实你如果不怕费样品你用150mA转10分钟就能发现 30左右的已经上去了
  转到40分钟左右 30左右的刚转完 全 45分钟 30左右的并没有转过!
  我们科室为了节约时间,有时候是一块胶转几次(因为一抗不同),样品上的大量一点 大小在30附近的蛋白 每20分钟转一次 一块胶能转至少4张膜呢!

• INK (2014-5-08 17:34:25)

  
  谢谢以上各位园友的大力帮助，不知道大家是否都是用半干转还是其他什么方法呢？麻烦一并写清楚，大家才好对号入座，多谢多谢！
  希望更多的战友加入进来哟

• INK (2014-5-08 17:35:22)

  半干转六一的
  统一是150mA 恒流
  10--90 40分钟
  90--120 50分钟
  其实一般转45分钟都没问题
  ......
  
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  楼上所说的“一般转45min都没有问题”，意思是大概转这个时间点的话，20－100kD范围内的蛋白都会在膜上么？如果如此的话，那么我想以后的园友大部分能够参考这个时间点了
  另外，关于设定电流还是电压的问题，我曾经从书上看过最好是设定恒流，因此，我不知道电流设定的规则，望各位高手指点一二
  

• redbutterfly (2014-5-08 17:36:00)

  
  这台仪器感觉转膜效率不怎么高，试了很多种条件，恒流从20mA到100mA，不同的时间，感觉丢失比湿转要大，如果是在做不出来可以看看加大上样量看看，仅供参考！

• 箭头儿 (2014-5-08 17:37:06)

  
  you can not judge the effect of transfer by prestained marker according to our experiences,in fact, when you put the membran on the gel,it is easy for marker to stain the gel even there is no electricity.Maybe you can stain the gel to know whether you target protein transfer to membrane.

• INK (2014-5-08 17:37:23)

  
  请问楼上的意思是用考染染胶和丽春红染膜么？在70－90之间会有很多条带，如何判断自己需要的蛋白已经没有在胶上，而在膜上了呢？