【求助】WB上样量应为多少？

最新回复

• PINK (2014-5-08 18:18:17)

  
  上样量的多少与目的蛋白的丰度有关系，由于组织相对于细胞来说杂质较多，上样量相对的要大些，一般可30～70ug，也有上到100多ug的，你可以设几个剃度自己摸摸。

• pengke1983 (2014-5-08 18:18:55)

  
  上样量的多少与目的蛋白的丰度有关系，由于组织相对于细胞来说杂质较多，上样量相对的要大些，一般可30～70ug，也有上到100多ug的，你可以设几个剃度自己摸摸。

• orangecake (2014-5-08 18:19:18)

  
  看看这个贴子可能对你有些帮助
  cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=8860866&sty=1&tpg=7&age=0')

• youyou99 (2014-5-08 18:19:45)

  这要根据你做的蛋白表达量多少，一般是用DAB显色要50-100μg，用ecl曝光上样量为20-40μg。但根据你蛋白表达量的不同目标蛋白绝对量DAB法至少50pg，ecl法至少20pg。

• 9900 (2014-5-08 18:20:55)

  我也用组织作过western，蛋白浓度的确很高。
  通常我上50-100ug，足够了。如果蛋白浓度太高导致上样过小，可用裂解液稀释蛋白使总上样体积在10ul即可，勿用水稀释会改变PH值。
  上样不要过高，否则条带兜一大坨，不好看。
  具体还得在试验后确定，如果内参出来，目的蛋白不出来，可能表明目的蛋白丰度低，上样量相对不足可在增加上样量试试。
  当然目的蛋白不出来的原因有很多：）这只是从上样的角度考虑。

• idea2011 (2014-5-08 18:21:30)

  
  我前几天预示了一下，倒是有条带，我我算了一下就150-160μg,请问一下各位，加这么高的量可以吗？

• gmjghh (2014-5-08 18:21:50)

  
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  关键是你自己分析一下你底预实验结果，最后得到清晰而不太浓密底条带最好。其实WB控制最后显示底条带不仅可以控制上样量，还可以控制WB整个过程中底许多环节，所以不要怕试，多做几次浓度剃度底预实验，比在后面老是瞎作一气好。还有具体多少量确实别人也不能帮你回答。

• eric930 (2014-5-08 18:22:38)

  
  上多少没关系，关键是能上得去，并且跑出来有条带。如果只在160ug能做出来就用160ug.