【求助】SDS-PAGE电泳制胶时浓缩胶长时间不凝

最新回复

• yayya (2014-5-09 22:56:45)

  
  一般室温下浓缩胶的凝胶时间不会超过３０min 你以前配胶用的溶液和体积有没有变．

• 大脑门儿儿 (2014-5-09 22:57:05)

  
  没变呀,体积肯定没问题,会不会是试剂的原因?时间放久了有影响吗?

• wanglaoshi (2014-5-09 22:57:24)

  
  AP可能有问题,用新的试试,或者加大TEMED的量.

• 鲇鱼少爷 (2014-5-09 22:57:44)

  
  可能是过硫酸铵放置时间太长，可以重配；也可以适当增加过硫酸铵的用量和TEMED用量。还要考虑室温，室温过低，凝得很慢。

• yayya (2014-5-09 22:58:03)

  
  与TEMED用量和温度都有关!

• sunbent (2014-5-09 22:58:27)

  
  首先考虑是AP的问题

• ha111 (2014-5-09 22:58:51)

  
  还不可以的话，可以试试进行加热，温度不要超过８０摄氏度．一般会凝的比较快．最多五到六分钟就凝了．

• wanglaoshi (2014-5-09 22:59:21)

  我最近也在做，也碰到过这个情况，后来换了新的TEMED就凝了，可能是过期了，还有过硫酸胺容易挥发，最好用了一段时间以后新配。当然也要检查一下配方比例是否有问题，或是移液枪有问题,因为都是微量,稍有出入就有影响.

• tewank (2014-5-09 22:59:47)

  
  最近也在跑电泳，遇到过这种问题，有可能是AP有问题，我这里一般是一个周就要重新配一次，再就是加大TEMED的量，以前有师兄做直接加到7~8微升，AP的量加到两倍，这样很快就凝了，但是往板里加胶的时候一定要快，晚了就凝了，再就是还有一种可能，就是膜梳与板不配套，比如说玻璃板的有玻璃条的那个比较厚，最好用1.0的梳子，但是用0.75就会凝固不好，加样孔歪歪扭扭的，以前我以为是凝的不好，怀疑试剂，在重新配之后才发现是还存在这种问题，换后梳子后就OK了，试试吧，祝你成功！

• nikonun (2014-5-09 23:00:08)

  
  理论上来说，胶的凝固与AP和TEMED以及温度有关，但是你所配制的分离胶应该是用相同的AP和TEMED吧？如果这样的话，所以我觉得问题不是出在这里，
  分离胶和浓缩胶所不同的试剂就是Tris-CL,分离胶所用的是1.5M，PH值为8.8的Tris-CL，而浓缩胶用的是1.0M，PH值为6.8的Tris-CL，除此之外，其他的试剂都相同，如果配制浓缩胶和分离胶的其他的试剂都是相同而出现分离胶能凝浓缩胶不能凝的话，那么原因很可能就是出在你的1.0M的PH值为6.8的Tris-CL上，可能是污染了或者是其他什么原因，影响凝聚的原因不明，所以当你提高了温度、加大了TEMED的量、重新配制了AP之后还是不能凝的话，你不妨重新配制一次Tris-CL试试看
  祝好运