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【求助】帮看看我的2-D图

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-5-10 09:48    作者: chuntian1983    来源: 分析测试百科网

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【求助】帮看看我的2-D图

小弟刚做双向，用的11CM pH3-10的胶条，上样量80微克，发现每次跑的点都很少，右上角的碱性端基本就是空白，聚焦不知怎回事，电压也总是升不上去，用Clean up 试剂盒处理了效果也不佳，用的pls公司的设备，麻烦各位帮分析一下，并能提供一些宝贵意见，小弟不甚感激！！
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最新回复

  • bring (2014-5-10 09:48:58)

    是不是实验的条件，还有环境的因素？

  • redbutterfly (2014-5-10 09:49:25)


    跟我的情况好像哦
    我跑了近两个月，一直都是这种情况
    还想着用Clean up试剂盒或者脱盐柱试试呢，
    看来，还得从其它方便找找原因吧

  • www.1 (2014-5-10 09:49:45)


    问题不象是在用Clean up试剂盒或者脱盐柱。感觉是在蛋白提取上的。80足够了，我一直都用50。有时候标本量少的时候，20左右都没问题的。

  • chuntian1983 (2014-5-10 09:50:16)

    我做的猪肌肉组织样，用的是研磨匀浆方案提取蛋白，在4度冰箱中裂解1小时，而后4度12000g离心45分钟，取上清-80度保存，定量结果也都比较正常，裂解液配方也是参照一些文献上肌肉蛋白提取的比较好的裂解液配方，试剂都是国外进口的，不知提取的过程中哪些会出问题了，麻烦kazenn能详细谈一下吗，为什么会导致2-d图蛋白点的蛋白点那么少！！谢谢！！！

  • damingxia0904 (2014-5-10 09:50:33)

    你和我的方法不太一样，我用的裂解液是Lysis Buffer具体配方网上就有。但是记住要用2-D专用的Lysis Buffer。用超声波碎解细胞。现在在家手头没资料。改天上传。

  • viviwang1987 (2014-5-10 09:50:52)


    电压上不去是不是样品中的盐浓度太高了。你的点好像不是很多。

  • chuntian1983 (2014-5-10 09:51:15)


    用clean up试剂盒处理后3-10的胶条也还是升不上去，但4-7的确比较好升，让人很纳闷，点是不多，每次都差不多！！

  • bring (2014-5-10 09:51:46)


    用酚抽提试一试 我有个同学做真菌的做的很不错

  • greenbee (2014-5-10 09:54:20)


    酚抽提是怎么回事，是提完后处理还是提的时候处理呀，有没详细的步骤，麻烦你传一些，谢谢了！！！
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