【求助】问关于蛋白质检测问题

最新回复

• flower@@ (2014-5-10 09:55:25)

  先说清楚对方要你做ELISA的目的是什么，想说明什么问题？

• shkudo (2014-5-10 09:58:00)

  用ELISA检测蛋白是否存在。

• bangqi_k (2014-5-10 10:01:36)

  既然你已经知道这种蛋白在血细胞上，为什么还要检测蛋白是否存在，可能我还不太明白你的意思，不过膜蛋白做ELISA我做过，供你参考
  1 取一定量细胞（视膜蛋白表达量而定），PBS洗两遍，膜蛋白裂解液裂解细胞，用ELISA的包被液稀释膜蛋白（浓度要摸），4度过夜包96孔酶标板
  2 接下来步骤就是ELISA常规步骤，封闭，洗涤，一抗，二抗，显色，终止，测定，一抗要稀释为几个浓度梯度。
  3 一定要一式两孔的做，求平均值，减去空白对照

• 大尾巴 (2014-5-10 10:02:00)

  
  主要是ELISA试剂盒的问题，到公司咨询一下，否则自己制板子加上抗体对于1个蛋白来说太过奢侈了。

• xueyouzhang (2014-5-10 10:02:16)

  
  师兄我想问一下我要测蛋白，怎么包被？你所说得包被液是什么？

• wsll (2014-5-10 10:02:35)

  
  我想检测血细胞表面的纤维连接蛋白的量，我想用Western-bliot、半定量RT-PCR都不能比较准确的测出，能否用ELISA的方法测亚？有听说可以先把细胞裂解掉，然后用ELISA测，请问可不可亚？我迫切的需要您们的帮助！谢谢啦！

• wsll (2014-5-10 10:02:57)

  
  请教，你提到用ELISA检测膜蛋白，讲到
  1 取一定量细胞（视膜蛋白表达量而定），PBS洗两遍，膜蛋白裂解液裂解细胞，用ELISA的包被液稀释膜蛋白（浓度要摸），4度过夜包96孔酶标板
  2 接下来步骤就是ELISA常规步骤，封闭，洗涤，一抗，二抗，显色，终止，测定，一抗要稀释为几个浓度梯度。
  3 一定要一式两孔的做，求平均值，减去空白对照
  那我检测血细胞表面纤维连接蛋白可否用同样的方法亚？

• wsll (2014-5-10 10:03:55)

  请问永远没有征兆 ，你现在是否用ELISA测了血细胞上膜蛋白的量亚？是否可以定量的测到？是怎么做的呢？我急需你们的帮助！谢谢了！