【求助】在离子交换初步提纯蛋白之后，怎样除盐...

最新回复

• wanglaoshi (2014-5-10 10:31:28)

  除盐可考虑下面几种方法:
  (1)以Sephadex G25分子筛除盐
  (2)透析除盐
  (3)还可以直接稀释降低盐浓度(电导率),可行性也不错.
  方法(1)要快一些,但要另装柱;方法(2)操作方便,但在时间上可能要长一些.
  蛋白浓缩的方法很多,可考虑用离子交换柱.纯品上样后以高盐洗脱,在操作上也比较方便,蛋白质量回收率较高.

• flower@@ (2014-5-10 10:31:49)

  
  我们实验室提蛋白基本上就是两部：
  1、离子柱或者ni柱，初步纯化。
  2、蛋白样品浓缩走FPLC,S100分子筛，既可以纯化出蛋白，同时将蛋白交换到理想的buffer中。（不过要小心，要先试试，样品是不是会在交换bf的时候会不会沉淀）。

• 6327555 (2014-5-10 10:32:11)

  QUOTE:

  原帖由 flower@@ 于 2014-5-10 10:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  我们实验室提蛋白基本上就是两部：
  1、离子柱或者ni柱，初步纯化。
  2、蛋白样品浓缩走FPLC,S100分子筛，既可以纯化出蛋白，同时将蛋白交换到理想的buffer中。（不过要小心，要先试试，样品是不是会在交换bf的时候会不会沉淀）。 ...

  大批量提纯的话，FPLC也可以？

• flower@@ (2014-5-10 10:32:36)

  
  你说的大批量是多少？
  我们实验室100mg的也都是用FPLC，没有问题的，你可以每次上样的时候少上一点就是了，量太多了，分离效果会差一些。

• DNA (2014-5-10 10:32:55)

  
  如果你分子量比较大的话。可以考虑用超滤。因为超滤最小的截留分子量要1KD，作成超滤管的MILLIPORE的最小截留分子是3KD或者5KD，所以你可以根据你的分子量大小来决定是否可用超滤

• HPLC使者 (2014-5-10 10:33:18)

  
  G50也是可以起到除盐和浓缩的作用，效果还不错。

• chengjie79 (2014-5-10 10:35:17)

  
  Sephadex G-25 是专业用来脱盐的。如果试验室有其它分子筛，拿来用用也无妨。
  冻干也是个不错的浓缩办法，如果你有冻干机。

• DNA (2014-5-10 10:35:45)

  
  但是冻干是不能脱盐的。。