【求助】最近为什么老跑出这样的图？

最新回复

• kuaizige (2014-5-10 16:36:35)

  
  可能样品中的杂质太多了，变性煮沸离心去沉淀试试。

• toy (2014-5-10 16:37:01)

  额滴神哪！
  能不能说一下样品的制备和处理过程，还有胶浓度，制胶过程，见过很奇怪的胶，没见过这么不可思议的胶。

• 33号 (2014-5-10 16:37:20)

  
  你灌胶的时候不会忘了加SDS了吧，呵呵

• zhenxin (2014-5-10 16:38:18)

  
  多谢各位前辈的热心帮忙，但我到现在还是不明白个中原因。要说是样本处理的问题，我原来的胶跑得还算满意，要说是偶然因素，我遇到类似这次的情况不止一回。所以说忘记加哪种试剂或是样本和灌胶过程有问题，我觉得可能性都不大。但不知道是什么原因，最近聚焦的电压总上不去，原来都能上到10000v，最近有时只到6000或7000左右，加盐桥也没用。因此，我判断问题出在等电聚焦，但到底是什么东西影响了聚焦，我也想不明白。盐多可能是其中一个原因，但我原来曾经跑过而且比较满意的样本目前也跑不出来，所以我觉得也不是只要因素。我现在觉得有些试剂失效可能是最主要原因，尤其是两性电解质，我昨天已经用了新的两性电解质处理样本，明晚就会有结果，看到底是不是它造的孽。最后，再次感谢各位朋友的支持！

• remenb (2014-5-10 16:48:24)

  
  呵呵呵！真是长见识了啊！
  关注中！希望楼主反馈！
  感觉一向二项都不好啊
  除了聚焦之外，是不是配胶试剂或者过程也出了问题？

• ero11 (2014-5-10 16:49:14)

  
  把配胶用的缓冲液重新配制试试！

• zhenxin (2014-5-10 16:50:16)

  呵呵，非常非常感谢各位前辈的关注。从目前的结果看，我仍然觉得是一向的问题。昨天的图已经出来了，所有试剂除了两性电解质，其它和原来的都一样，图如下，希望大家继续发表高见。

  
  74041388.jpg

• zhenxin (2014-5-10 16:51:27)

  二向就算有问题，也是蛋白的溶解不好导致的，配胶等程序上应该没有太大问题。

• jkobn (2014-5-10 16:55:09)

  
  感谢楼主反馈！
  不懂的是，为什么两性电解质会出问题呢？这东西一般也不会变质的。楼主用的是什么牌子的？浓度多大？保存条件？用了多久？使用浓度多少？
  希望楼主详细反馈，以给其他战友借鉴，论坛交流的好处也在于此，可以以少数人失败经验给多数人提醒、借鉴。
  为什么电解质出问题会出现上面的图的样子呢？

• jkobn (2014-5-10 16:55:31)

  二向就算有问题，也是蛋白的溶解不好导致的，配胶等程序上应该没有太大问题。
  
  ==============================================================================================================
  
  两性电解质帮助蛋白质溶解，但也并不是肯定是必须的，没他就不行，就跑不出图跑不出点的。所以，就算是两性电解质“不起作用”图也不应该是这个样子。所以是不是两性电解质出问题了起了“负面作用”呢？
  另外请问你的这次电压是不是顺利上升了呢？
  另外是不是电解质密封不好呢？
  大胆分析猜想一下：
  电解质密封不好，水分丢失，电解质浓缩，使用浓度偏高，导致聚焦电压上不去，一项聚焦不好，蛋白质沉淀析出。

• zhenxin (2014-5-10 16:56:08)

  
  多谢各位朋友的热心支持。我用的是Bio-Lyte 3/10 Ampholyte，原始浓度是40%，使用浓度是0.2％。由于平时用量很少，而原装是10ml，所以我用EP管装出0.5ml，没有避光，直接放4度冰箱保存，每次就用EP管内的两性电解质。后来，实在是找不到出现上面第一张图像的原因（我连续出现了3次这样的图，而且是不同样本），我偶然发现，Ampholyte的原装瓶子是棕色的，会不会需要避光保存？因此，我怀疑会不会是Ampholyte出了问题，在重新从原装的瓶子内取用Ampholyte后，就跑出了上面第二张图（在跑一向时，我把电流值由原来的50mA调到了60mA，电压比之前跑第一张图时确实高了不少，波动在9000～9500V之间，但以前我基本都可以达到10000v），到目前为止，我只能是怀疑，还不能决定是否是Ampholyte在造孽。至于Ampholyte失效如何影响聚焦和二向，我不得而知。
  昨晚开始，我又重新用新的Ampholyte处理上面第一张图的标本，今天看一向的电压也不怎么满意，大概在7500V左右（仍然用60mA，放了盐桥），二向明天跑，不知道结果还会不会那么郁闷。