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【求助】有谁知道准确检测GFP表达的方法嘛？

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-5-10 17:53    作者: mamamiya    来源: 分析测试百科网

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【求助】有谁知道准确检测GFP表达的方法嘛？

好啊，
我是利用酵母表达一个含有GFP的融合蛋白，然后用流式细胞仪和荧光酶标仪来检测蛋白表达，但是后来发现这两种手段都不能准确的显示蛋白在不同时间的表达情况，就是说些许的测量条件变化甚至换个孔板点样都会导致检测数值的差异，所以现在很苦恼，有什么方法可以比较准确的监测GFP的表达量呢？请各位知情的大虾帮帮忙啊，谢谢先
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最新回复

  • bring (2014-5-10 17:54:04)


    可以在蔡司的激光共聚焦看看!

  • mamamiya (2014-5-10 17:54:23)

    谢谢，不过我想是可以有个办法可以定性并且可以定量的，有嘛？就是说可以对不同样品中GFP的表达量进行比较并定量，有比较精确的方法或仪器可以用嘛？

  • gogo (2014-5-10 17:54:38)

    根据你的描述 我觉得你的研究目的是：关心蛋白在不同时间的表达情况
    基于这个情况
    首先你可以把每个孔板看作一个样本 然后同时处理若干个有统计学意义的样本 再将每个样本的测定结果加以分析（最简单的就是算术平均值）
    其次我觉得流式已经是一个比较精确的手段了 你不必再寻找更有效的技术了 可能好的分析方法比高级的分析仪器更能帮助你

  • mamamiya (2014-5-10 17:54:57)

    谢，不过我们没试过在孔板中养酵母，而且我不清楚孔板中的培养条件好不好，这种测试结果能否说明问题等等。

  • gogo (2014-5-10 17:55:19)

    "就是说些许的测量条件变化甚至换个孔板点样都会导致检测数值的差异"
    我是从你的描述中看到孔板字样的，所以会认为你使用这种培养方式
    孔也好，管也好，都是举例
    意思是说把它看成为一群样本中的一个样本

  • mamamiya (2014-5-10 17:55:38)

    你的意思我可否理解为多做几个平行样，只要误差不大就可以啦？是不是也没有什么较精确的方法了，我查了N久都无收获，大家基本都是用的这种手段，呵呵
    谢谢啦

  • gogo (2014-5-10 17:55:59)

    有误差也没关系 可以通过计算平均数的方式来减小偶然误差
    也不能说没有更精确的方法了 只是觉得可能并不需要太精确的方法
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