【求助】westenblot蛋白条带位置不对！

最新回复

• janlont (2014-5-10 20:45:30)

  浅见：首先查清楚目的蛋白是否是多聚体的形式，还有就是抗体是否弄错了

• 黄花菜 (2014-5-10 21:21:05)

  
  是个催化亚基，不应该有多聚体！那怎么办

• mybioon (2014-5-10 21:21:24)

  这种问题，首先是看你的抗体是否是多克隆抗体，如果是，这种情况时可能发生的。你加大上样量，继续做做试试。如果是单克隆抗体发生这种情况可能是你做的蛋白在提取的时候，处理时已经解离。我不知道你做的是什么实验，既然蛋白是115kd，是不需要50-60kd这一部分胶的，如果需要转膜，条件也是不同的，不大可能同时都转上。不知道，你做的是不是免疫共沉淀，如果是，你可以考虑更换抗体。

• newway (2014-5-10 21:21:49)

  
  如果是免疫共沉淀，一个更可能的答案：抗体重链，谢谢。
  To 4楼：可以一起转膜的，条件也可以相同，影响不是特别大。你提到的这部分可以割掉是绝对正确的。
  建议：先割掉50－60KDa这部分胶仅转80KDa以上的胶试试，如果你不需要下面的条带的话；如果要也可以割开分别标记抗体嘛（原因：至少说明50－60KDa这部分有个咚咚对你抗体吸附能力更强，当然优先出现你看到的条带，如果你的抗体本身质量太差特异条带就消失了；如果没有了这部分，也许能出现特异条带呢？who knows?)
  然后建议抗体浓度提高一倍、2倍。。。总之尽量看看有没有条带先。实在不行，换抗体吧。

• 黄花菜 (2014-5-10 21:22:10)

  
  首先感谢各位的帮忙！
  我的抗体是单克隆的，是santacruze产的抗体。我的实验是蛋白的sds－page电泳，然后湿转印，ECL发光。就是westenblot！
  “To 4楼：可以一起转膜的，条件也可以相同，影响不是特别大”这个我也同意，的确，我们有的时候同时使用2种一抗，相同的二抗，也有人出来结果。
  我试验一下，把抗体浓度提高一倍吧，1：400变为1：200
  转膜之前切掉50－60那部份的胶。
  很难过，很着急，抗体用一个月，也不对，如果投诉它或换新的抗体，还要1个月，我真的很难受。
  不知道还有没有别的办法。

• milkdog (2014-5-10 21:22:47)

  
  to5楼、六楼。是可以的，但是如果115kd转的比较充分的话，50-60kd的往往都转过了，我做的时候效果不是太好。我用的也是santa的抗体，1：200稀释。如果还做不出来，可以考虑是抗体问题。santa的抗体有时候也有做不出来的，我就曾经换过一个。

• lgm (2014-5-10 21:28:01)

  转膜时间不够，注意marker的蛋白不可以用做转膜成功与否参考！
  建议先用考染看看跑胶效果后再进行下一步工作。不然只会浪费抗体。