【求助】透析和超滤法浓缩蛋白除水时，会不会...

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• 04906 (2014-5-12 17:12:43)

  
  透析和超滤浓缩法，肯定是要把离子去掉的，这样才能保证buffer的离子浓度不会改变的，而蛋白得到了浓缩。
  浓缩后一般放在-80，也可以冻干后放-80长期保存。

• lxh031 (2014-5-12 17:14:58)

  我还有个问题，我做的是一个胞外蛋白酶的浓缩，如果是金属蛋白酶的话，用上述两种方法的话，会不会将金属离子透析或超滤出去，酶从而丧失活性？

• wmp1234 (2014-5-12 17:19:40)

  
  你纯化的时候添加了这种金属么？ 透析或超滤会降低金属离子浓度的，但是否影响你的蛋白，你可以透析后再测定蛋白活性呀。蛋白的活性与缓冲液的pH,盐离子等都会有影响
  另外要注意蛋白反复冻融会出现沉淀的，所以建议冻存时先分成小包装，多冻几管

• hot_hot_hot (2014-5-12 17:20:27)

  你纯化的时候添加了这种金属么？ 透析或超滤会降低金属离子浓度的，但是否影响你的蛋白，你可以透析后再测定蛋白活性呀。蛋白的活性与缓冲液的pH,盐离子等都会有影响
  另外要注意蛋白反复冻融会出现沉淀的，所以建议冻存时先分成小包装，多冻几管
  
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  "透析或超滤会降低金属离子浓度的"我觉得值得商榷的。
  正如楼上所说的“buffer的离子浓度不会改变的，而蛋白得到了浓缩”。因为在超滤过程中，理论上水分子和离子透过滤膜的几率是等同的，所以离子的浓度是不变的。
  具体情况是该蛋白结合金属离子，会不会因为蛋白浓度升高而释放出金属离子呢？
  同时，蛋白质也是带有电荷的，浓度升高时可能会电离出部分电荷，从而影响溶液pH值。
  没有研究过后两种情况，不过感觉产生影响的可能性不大。
  

• lxh031 (2014-5-12 17:20:47)

  我并不知道是什么金属离子，只是猜想，因为我测的是种新酶的活性，很多性质不了解，而且测得的活性并不理想。

• lxh031 (2014-5-12 17:21:46)

  
  不知道哪里还有测胞外酶活性的资料，哪位知道拜托指点一下或传一下，我现在是都快焦头烂额了。

• fei1226com (2014-5-12 17:22:04)

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