【求助】有没有高手做脑组织线粒体2D

最新回复

• huifeng0516 (2014-5-15 16:49:34)

  
  我做的是Mitochondria protein-enriched fraction 的2DE
  离心力10000至12000g，10min，沉淀的线粒体已较纯了。加入裂解液后，超声使线粒体破膜，蛋白释放。在25000 g离心，1hr，上清即为Mitochondria protein-enriched fraction。
  供参考，祝实验顺利。

• ffaa (2014-5-15 16:50:04)

  
  请问楼上的，我是做心肌组织的线粒体分析，我用PERCOLL纯化，然后做线粒体蛋白的WS，请问下要用什么做内参？

• huifeng0516 (2014-5-15 16:50:31)

  
  恕偶愚钝，“WS” 是什么意思，是western blot （WB）么？
  如果是，那么beta-actin 就可以。

• dmg (2014-5-15 16:50:58)

  我还有些具体细节想请你给予指点：
  1、你提得是什么组织的线粒体
  2、密度梯度离心你用的是什么，具体步骤如何
  3、线粒体纯度到底多少才符合蛋白组学的要求
  我用了两种密度梯度离心，线粒体倒是挺纯的但是现在重复不出来了不知哪里出问题了，急！！

• huifeng0516 (2014-5-15 16:51:40)

  
  我做的是特定脑区的线粒体。
  对线粒体纯度的要求，看你的试验目的了：
  如做表达蛋白质组，那需要线粒体很纯，用Ficoll液纯化，有条件在电镜下观察一下。
  如做差异蛋白质组，就不需要特别纯了。很多文献，包括我自己都是做Mitochondria protein-enriched fraction。毕竟目的是找差异蛋白。当然，纯化了更好。
  祝实验顺利。

• dmg (2014-5-15 16:52:26)

  您好！！！我是做脑皮层线粒体差异蛋白组学，我线粒体的提纯用的是Ficoll纯化，也在电镜下照了片子。纯度还是挺高的。但是因为前一阵我又加了一步Nycodenz纯化，纯度比单纯FICOLL纯化要高些，我实验室老师就像让我用两步密度梯度离心，但是最近加第二步Nycodenz纯化时提不出东西来，很是郁闷。您有没有国外纯化脑组织线粒体做蛋白质组学的较牛的文章让我给我实验室老师看下，让我可以不用加Nycodenz这步离心。
  谢谢DIGH兄指点！！！

• huifeng0516 (2014-5-15 16:52:58)

  
  为你提供一篇文献吧，这是我最早参考的文献，由于超过300KB，没法帖附件，只好把题目和作者告诉你。
  Authors：Jinghua Jina, Gloria E. Meredithb, Leo Chena, Yong Zhoua, Jing Xua,
  Feng-Shiun Shiea, Paul Lockhartc, Jing Zhanga,*
  Title：Quantitative proteomic analysis of mitochondrial proteins relevance to Lewy body formation and Parkinsons disease。 2005
  PubMed链接 cuturl('http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?CMD=search&DB=pubmed')
  其他相关文献可在PubMed上查一下。
  希望有帮助。