【求助】GST 融合蛋白是包含体怎么办？

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-5-15 17:51 作者: flower@@ 来源: 分析测试百科网

我表达一个GST融合蛋白，用的是载体 pGEX-6P-1, 我的目的蛋白为约11KD，但是诱导表达后竟然蛋白在沉淀中，形成包含体。后来我又在低温 16度诱导了3.5 hr, 还是形成包含体。请问让蛋白可溶有什么办法啊？我的这个蛋白是想做抗体用的，如果融合蛋白一起去免疫兔子是不是不好呢？谢谢了！

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【求助】GST 融合蛋白是包含体怎么办？

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最新回复

mimili_901 (2014-5-15 17:52:13)

最好表达后切下来再免疫
kulee (2014-5-15 17:52:30)

可以对包涵体进行变性复性，使之变成有活性的蛋白。
flower@@ (2014-5-15 17:52:57)

请问怎么变性复性啊? 能不能说具体点?
dog002 (2014-5-15 17:53:14)

我记得包涵体可以做抗体。有的人跑完SDS-PAGE后切下目的蛋白相应的胶条，抽取蛋白去打抗体。
zhezhe (2014-5-15 17:53:39)

QUOTE:
原帖由 mimili_901 于 2014-5-15 17:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
最好表达后切下来再免疫

请问一下，直接跑PAGE胶回收免疫，蛋白是要复性透析后再上样的吧，我在做一个蛋白，包涵体很浓，不知道用此法上样浓度多少比较合适呢？（包涵体不是很纯）。
mimili_901 (2014-5-15 17:54:04)

具体的变性复性的方法在分子克隆上有详细介绍。
BUK (2014-5-15 17:54:23)

包含体可以直接做抗体，不用复性。我做的方法是包含体直接电泳，然后切胶把胶捣碎后直接免疫兔子，没问题的。
flower@@ (2014-5-15 17:54:47)

QUOTE:
原帖由 BUK 于 2014-5-15 17:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
包含体可以直接做抗体，不用复性。我做的方法是包含体直接电泳，然后切胶把胶捣碎后直接免疫兔子，没问题的。
这样用包涵体免疫兔子，产生的抗体中是不是也会产生抗GST的抗体呢？这样对下游试验是不是会有影响？怎样排除GST抗体对试验产生的影响呢？
30moonriver (2014-5-15 17:55:09)

好象是包含体是可以不用复性就有可以免疫兔子，但是具体方法你再查一下。
既然这样，就把GST部分切掉吧。我的意思是把载体上的GST基因切去，看有没有合适的酶切位点。这样比表达后切割蛋白要容易得多。